一、标本制备 细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上,也可将一定量的细胞收集离心制成涂片。
二、固定和固定制
对于活细胞标本,常用的固定剂有以下几种。
1. 福尔马林类
10 %福尔马林或10 %中性福尔马林,其中以10 %中性缓冲福尔马林固定效果最好,最为常用。
2. 丙酮类
纯丙酮固定效果好,对抗原的影响也较小,95 %乙醇的固定效果与丙酮相似但不如丙酮好。如在乙醇中加入1 %冰醋酸可增强固定效果,加入少量氯仿可有利于抗体的穿透。
3. 4 %多聚甲醛类
将多聚甲醛40 g溶于0.1 M PBS 1000 ml,加热至60 ℃左右,边搅拌边加温至透明为止(一般需滴加少许1 M NaOH才能使溶液清亮)。该固定剂较温和,适于标本的较长期保存。 目前尚未发现一种通用的固定剂,对各种不同的抗原都有满意的固定效果。比较而言,中性缓冲甲醛是适用性较广的一种固定液。必要时,可用多种固定液作比较,从中挑选出对某种抗原效果最好的固定液。 展开 |