流式中的“门”
流式操作者的一项必不可少的技能就是设门。设什么样的门以及如何去设门，对于流式数据分析来说都是十分重要的。下面我们将给大家介绍几种门的功能和用法。
“阈值”门
“阈值门”并不是真正意义上的门，但它在流式分析中非常重要，它决定了收集的有效粒子数目和流式细胞仪的工作效率，合适的阈值能有效的区分背景荧光和碎片。我们可通过荧光通道或散射光通道来设置“阈值门”，分析体积较小的粒子或细菌时，可选择设置荧光通道阈值门。
散射光通道设门
散射光通道反映粒子的大小、颗粒度、形状等信息，可辅助排除碎片和细胞粘连，经典的应用是将血细胞区分成淋巴、单核和粒细胞。某些情况下，散射光通道可提供更多有价值的信息。
双粘体排除门
流式细胞术检测的是单个细胞，样本中（特别是实体组织样本）有时会出现细胞粘连，两个细胞或多个细胞一起通过流动室，产生异常的信号，对检测结果造成干扰。想排除这些粘连体并不难，可通过同时显示某一通道的高度信号（H）和面积信号（A）来设门排除它们。如图所示，双粘体脉冲面积较大，可与单个细胞相区分。
“包含”门与“排除”门
选择“包含”门或“排除”门，需要视抗体标记和区分粒子或细胞的难易程度，视哪种门能给分析结果带来更多的特异性而定。大多时候分析者使用“包含”门，如检测T细胞亚群时，需要针对“包含”于“淋巴门”内的细胞进行分析。相比之下，“排除”门较少使用。BriCyteE6可以通过“逻辑”（NOT）来建立一个“排除”门。当目的细胞的抗体特异性弱于分析物中其他细胞或需要增加其他标志提高分析的准确性时，可使用“排除”门，如分析淋巴细胞时可使用单核细胞标志辅助去除淋巴门内的单核细胞。
反向设门
反向设门可以用于显示在某一图上的细胞群在另一图上的位置（设门后软件会对门内粒子标记上颜色，在其他的图中此团粒子均显示相同的颜色），它可用来辅助调节门的形状和大小，使设门更准确，也可用来观察门内细胞其他散射光和荧光信号信息。比如下图，观察CD45-SSC图中淋巴门内细胞在FSC-SSC图上的大小信息。
时间门
时间门在流式分析中经常被人遗忘，但它可以用来监测仪器的稳定性、查看检测过程中的流速变化等。如图所示，62.6s之前的液流是稳定的，粒子数目显示均一，之后有断流和粒子数目陡增现象，说明样本可能被吸空。这时可使用时间门，选择62.6s之前的粒子进行分析。
