实验方法原理

实验材料 MSCs

试剂、试剂盒 无菌完全培养培养基（CCM）、PBSA、胰蛋白酶 EDTA

仪器、耗材 聚丙烯离心管15 mL和50 mL、塑料组织培养皿直径15 cm、塑料微量移液器枪头

实验步骤

(a)检査所得的MSCs。如果培养物中小的、贴壁、纺锤形的成纤维细胞样细胞汇合至60%时，对其进行处理。如果单层细胞稀疏,继续润洗和更换培养基。

(b)按如下步骤消化单层细胞：用20 mL预热的PBSA润洗单层细胞后，加人5mL胰蛋白酶/EDTA。将培养皿置于37℃ 2min，在1O×放大倍数视野下观察单层细胞。贴壁细胞应正从塑料培养瓶上脱落。将培养皿置于37℃ 2min,再次观察。重复观察直到90%的MSCs已从培养瓶中脱落下来。加人5mL CCM,将10mL悬液移至15 mL离心管中，500g离心10 min。离心完毕，弃去上清，每管用1〜2mL预热的PBSA重悬沉淀。如有必要，混合多管细胞悬液只进行一次细胞计数。