B-hB7-H3小鼠

　　1、基本信息

　　2、B7-H3基因功能简介

　　图1 B7-H3介导的肿瘤免疫[1]

　　CD276 (Cluster of Differentiation 276)是人类CD276基因编码的I型跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族，也称为B7-H3。B7-H3的转录本在正常组织和实体肿瘤中广泛存在，但其蛋白仅在肿瘤组织中高表达，正常组织中表达量极低。B7-H3主要在免疫细胞（如抗原提呈细胞、骨髓细胞、单核细胞、T细胞）上表达，配体未知，可抑制NK细胞介导的细胞裂解，同时增强对细胞毒性T细胞的诱导，选择性产生IFNγ，另一方面也能对T细胞产生抑制作用，有助于肿瘤细胞的免疫逃逸。很重要的是，B7-H3在多种人类实体肿瘤中高度过表达，如膀胱癌、前列腺癌和黑色素瘤等，通常与患者的不良预后和较差的临床治疗结果相关。

　　3、表型分析

　　 B-hB7-H3小鼠mRNA表达分析

　　采用RT-qPCR法对WT和B-hB7-H3小鼠的B7-H3 mRNA表达进行品系特异性分析。

　　B-hB7-H3纯合鼠中hB7-H3的mRNA表达与野生鼠C57BL/6相似，说明B7-H3人源化小鼠模型并没有改变B7-H3的mRNA表达水平。

　　B7-H3抗体与B-CAG-hB7-H3 MC38细胞结合分析

　　通过流式细胞术测试B7-H3抗体与B7-H3人源化的鼠结肠癌细胞（hB7-H3-MC38）的结合。

　　单个活细胞圈门后用于进一步的分析。如图所示，与同型对照抗体(hIgG)相比，抗人B7-H3抗体(enoblituzumab，内部合成）与hB7-H3-MC38细胞有很强的结合。

　　B7-H3抗体药效验证

　　抗人B7-H3抗体在B-hB7-H3小鼠中的抗肿瘤活性

　　(A) 抗人B7-H3抗体可抑制B-hB7-H3小鼠中的hB7-H3 MC38肿瘤生长。将鼠结肠癌hB7-H3 MC38细胞皮下植入纯合B-hB7-H3小鼠（雌性，6-7周龄，n=5）中。当肿瘤体积达到约100 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人B7-H3抗体进行治疗。(B)治疗期间体重变化。如图A所示，enoblituzumab（内部合成）在一定程度上能抑制hB7-H3 MC38肿瘤生长，也表明B-hB7-H3为抗人B7-H3抗体的体内药效评估提供了一个有效的临床前动物模型。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。

　　4、研究进展

　　最近的研究表明，B7-H3在肿瘤的生长、侵袭、迁移及血管生成和转移中起着重要作用，由于其在免疫逃逸中的作用，B7-H3已成为新的免疫治疗靶点。主要免疫治疗手段有：单抗、双抗、小分子、ADC药物、CAR-T治疗等，临床上进展较快的是MacroGenics公司的enoblituzumab单抗及在此单抗基础上改造获得的B7-H3*CD3双抗（MGD009），B7-H3-ADC药物（MGC018）等， Daiichi Sankyo 公司的B7-H3-ADC药物（DS-7300a）。联合治疗方面，B7-H3和PD-L1对T细胞产生抑制作用，改变T细胞的微环境以逃避抗肿瘤免疫应答。而B7-H3和CTLA4也可能有协同作用，类似于B7-H3在PD-1通路中一样。

　　图2 B7-H3的潜在作用机制[2]

　　B-hCCR4小鼠

　　1、基本信息

　　2、CCR4基因功能简介

　　图3 CCR4在成人T细胞白血病/淋巴瘤细胞中类似CD4+CD25+Treg的功能[3]

　　CCR4 (C-C motif chemokine receptor 4)是CCR4基因编码的一种七次跨膜蛋白，属于G蛋白偶联受体家族，也称为CD194。主要配体有胸腺激活调节趋化因子（TARC/CCL17）、巨噬细胞的趋化因子（MDC/CCL22）、RANTES、MCP-1和MIP-1α。趋化因子是一组结构相关的小多肽分子，调节不同类型白细胞的运输，在免疫系统的发育、稳态和功能中发挥着一定作用，对中枢神经系统细胞以及参与血管生成或血管停滞的内皮细胞也有影响。CCR4主要表达在T细胞的几个亚群中，如Th2、Treg、Th17和Th22，在血小板表面也有表达。很多肿瘤细胞表面也高表达CCR4，如成人T细胞白血病/淋巴瘤、T细胞恶性肿瘤、宫颈癌、食道癌、肾癌、脑癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌及胃癌等，因此，血液癌细胞和非血液癌细胞都可以表达CCR4。与CCR4相关的疾病主要是自身免疫病如哮喘、皮炎和T细胞淋巴瘤。

　　3、表型分析

　　 B-hCCR4小鼠蛋白表达分析

　　通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hCCR4纯合鼠中

　　进行分析。

　　收集野生型C57BL/6和B-hCCR4纯合鼠的脾细胞，并用种属特异性抗CCR4抗体进行流式细胞术分析。结果显示：在C57BL/6小鼠CD4+ T细胞表面检测到mCCR4，在B-hCCR4纯合鼠CD4+ T细胞表面检测到hCCR4。

　　通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hCCR4纯合鼠中CCR4蛋白表达进行分析。

　　收集野生型C57BL/6和B-hCCR4纯合鼠的脾细胞，并用种属特异性抗CCR4抗体进行流式细胞术分析。结果显示：在C57BL/6小鼠Treg细胞表面检测到mCCR4，在B-hCCR4纯合鼠Treg细胞表面检测到hCCR4。

　　4、研究进展

　　在研的CCR4的拮抗剂包括小分子化合物和抗体，其中协和麒麟的CCR4抗体药Mogamulizumab（强ADCC作用）于2012年在日本首次被批准用于治疗其它恶性血液肿瘤，并于2014年被批准用于治疗CTCL（Lymphoma, cutaneous T cell）。CCR4抗体治疗肿瘤主要有2种方式：肿瘤表达CCR4，利用抗体的ADCC效应直接杀伤肿瘤；肿瘤表达CCR4配体，招募表达CCR4的Treg，利用抗体清除Treg解除免疫抑制。

　　图4 CCR4抗体的作用机制[4]

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　　百奥赛图单人源化小鼠列表

　　Note：

　　★ the in vivo efficacy was validated by using the reference antibodies (in Clinical Trail Stage).

　　√ the in vivo efficacy was validated by using partners antibodies (in Preclinical Stage).

　　〇 Human protein expression was validated by FACS.