Klenow酶是大肠杆菌八聚合酶I的羧基端片段,它具有DNA聚合酶和3’到5’方向的外切酶活性,不含5’到3”方向的外切酶活性。
实验材料 | DNA |
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试剂、试剂盒 | 限制性内切酶EDTA |
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仪器、耗材 | 水浴锅 |
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实验步骤 | 1. 在20 μl 反应体积中,用限制性内切酶消化0.1~4 μg DNA。
2. 加入1 μl 0.5 mmol/l 含各种dNTP的混合液,并加入1~50 U 的klenow酶,30℃温育15 min。
3. 75℃加热10 min或者加入1 μl 0.5mol/l EDTA以终止反应。 |
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