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大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验——修复突出的3’或5‘末端

2019.3.25

Klenow酶是大肠杆菌八聚合酶I的羧基端片段,它具有DNA聚合酶和3’到5’方向的外切酶活性,不含5’到3”方向的外切酶活性。


实验材料

DNA

试剂、试剂盒

限制性内切酶EDTA

仪器、耗材

水浴锅

实验步骤

1.  在20 μl 反应体积中,用限制性内切酶消化0.1~4 μg DNA。

2.  加入1 μl 0.5 mmol/l 含各种dNTP的混合液,并加入1~50 U 的klenow酶,30℃温育15 min。

3.  75℃加热10 min或者加入1 μl 0.5mol/l EDTA以终止反应。


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