枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备实验——化学法
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备可应用于:(1)建立枯草芽孢杆菌转化体系;(2)其基因改造;(3)提高枯草芽孢杆菌生产性能的相关研究。
实验方法原理 | 用SPI 培养基和 SPII 培养基结合EGTA进行转化。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | SPI 培养基EGTASPII 培养基柠檬酸钠EGTA氢氧化钠KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏( NH4 )2SO4 |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、试剂配制 1. SP 盐
2. CAYE (100x)
3. SPI 培养基
5. SP-A Salts Solution(500 ml)
6. SP-B Salts Solution(500 ml)
7. 100xCAYE Solution(100 ml)
(1)2% Casamino acid :2 g
8. SPI Medium(20 mL)
10. SPII Medium(6 mL)
11. 100xEGTA Solution
2. 转化前一天晚间挑单菌落至3 ml LB 培养基中,37℃,250 r/min 培养过夜。
3. 第二天上午取160 ul 培养液转接至8 ml SPI 培养基中,37℃,250 r/min 培养至对数生长末期(168 约4-5 h)。
4. 取0.2 ml 生长至对数期末的培养液至2 ml SPII 培养基中,37 ℃,100 r/min 培养90 分钟。
5. 在上述SPII培养基的菌体中加入20 ul 10mmol/L EGTA,再于37℃,100 r/min 培养10 分钟。
6. 将上述处理后的菌液分装成0.5 ml 每管,各加入5 ul DNA(DNA 量不能过高,不超过5 ug),再于37 ℃,250 r/min 培养90 分钟,取菌液涂布筛选平板。 收起 |
注意事项 | 1. 注意仪器用品的干净和无菌。
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