应用激酶交换反应的末端标记
应用激酶交换反应的末端标记
1．在置冰浴中的1.5ml微量离心管内依次加入：
50 pmol合成寡核苷酸
2.5μl 10×反应缓冲液
1.5μl ADP（300μmol/L终浓度）
10μl γ－[32P]ATP（33pmol）
1.5μl T4多核苷酸激酶（15U）
蒸馏水加至25μl
2．37℃水浴温育30分钟。
3．加入2μl 0.5mol/L EDTA或加热至68℃ 10min终止反应。混合液经Sephadex G-25自旋转，离心（2000×g，4min），去除未掺入的核苷酸。用液闪计数计数1μl柱洗脱液。
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