提高自制酵母细菌电转化效率最重要的两点
一:生长期
重要性无庸置疑,比如外源DNA基因组整合时,酵母通常选取OD600值为1-2左右.这是因为其时酵母分裂旺盛,细胞核膜较易被攻入(处于有丝分裂的前几期);同理,基因组DNA松散暴露,电转入的外源DNA较易整合; 细胞生命力也较强. 多种因素组合,使得转化率得以提高.
二:将你的细胞洗干净些
很多新手做细菌酵母电转效率不高的原因有时很简单.最后的细胞悬液中带有太多的离子,导致电流太强.曾看见新手电转时,电转杯中见火光;那已经不是实验成败,而是实验安全问题了
.建议不需要严格按书上所写步骤操作.如果自己不放心,可以多洗几遍.比如电转酵母需用水洗两遍,山梨醇洗两遍,我经常水洗三遍以彻底去除离子,效果很不错的.
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