第三代基因测序仪技术原理

2018年7月12日 21:45:32 来源: 互联网
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在分子生物学研究中,基因的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前(2009年)用于测序的技术主要有Sanger等。发明的双脱氧链末端终止法Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列。Sanger测序法得到了广泛的应用。

Sanger法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物,直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸,并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止,终止点由反应中相应的双脱氧而定。 [3] 


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