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光学显微镜视场光阑调节

2019.12.31

为获得更好的镜像反差，应尽量屏蔽多余的杂散光进人观测镜场或成像区域，在经目镜配合不同倍物镜进行观测时.可调节视场光阑像对应目镜镜场形成对接或稍过些;在显微摄影或数字CCD成像时，可根据取景框和CCD成像区域缩调视场光阑，但不要缩过造成照片切角。使用油镜时也可做适当缩小调节。

聚光镜数值孔径的设置

首先，配置聚光镜的数值孔径(numeric aperture,NA)范围应与物镜的NA值基本相等并标有NA刻度，高倍细微镜检时有必要在顶端加油。孔径聚光镜的作用是对应物镜数值孔径提供有效的聚焦投射光，如果设置聚光镜的NA大于物镜NA则一部分光浪费，而过小于物镜NA投射光不足且由于出射角改变使一部分光斜照射标本呈现衍射镜像，两者均会降低镜像的分辨率。因此，应遵循一定的对应设置原则，经验值是镜检观察时在对应物镜NA的80--100%内调至，摄影时为获得较合适的反差和景深建议设置在60一80%或70一80%。这意味着每转换不同倍率物镜时.都要做出对应调节.实际中还可根据标本薄厚、染色深浅进行细调。

覆盖差校正，标准盖玻片厚度0.17mm、载玻片1.0mm，由于采用不符合标准的盖玻片或载玻片加之切片、封片剂薄厚不均会产生覆盖差，影响较大NA物镜的镜像质量。为校正覆盖差，在40 x、60 x或20 x干系物镜上设计有覆盖差校正环(correction collar, CC)，校正范围一般在0.11--0.23 mm，长工作距离物镜可至2.0mm。应当精细掌握CC的调节要领，不然反而会带来麻烦，特别是当前一个实验者做了校正而下一个实验者的样片覆盖差不一致时。方法是，

先选调CC将0.17数值标线对准定位刻线，观察镜像是否能做到调焦清晰，如不很清晰则分别向左右方向旋调CC环直至镜像达最佳，且要坚持每当更换标本时均应完成覆盖差校正调节才能保证镜检质量。

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