覆盆子及有效部位对老年大鼠学习记忆能力的影响及机制初探

摘 要  

目的: 考察覆盆子有效部位对自然衰老大鼠学习记忆能力的影响。

方法: 18 月龄大的自然衰老大鼠分为老年组、银杏黄酮阳性组、覆盆子乙酸乙酯部位组、覆盆子氯仿部位组、覆盆子全药材组，另取 3 月龄的大鼠为青年对照组。覆盆子乙酸乙酯组、氯仿组、全药组分别灌胃给予相应提取物 12g / kg，阳性药物组给予银杏黄酮 5． 785mg / kg，老年组和青年组分别灌胃等容量生理盐水，连续 30d。检测大鼠在 Morris 水迷宫中的定位航行能力、空间探索能力，并检测大鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶、乙酰胆碱转移 酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总超氧岐化酶活性、过氧化氢酶活性及丙二醛含量。结果: 覆盆子乙酸乙酯组、覆盆子氯仿组、覆盆 子全药组均可不同程度缩短大鼠的逃避潜伏期，明显增加穿越平台次数; 覆盆子乙酸乙酯组、覆盆子氯仿组、覆盆子全药组、银杏黄 酮阳性组可明显提高老年大鼠脑组织中的乙酰胆碱转移酶活性，同时覆盆子乙酸乙酯组、覆盆子氯仿组、银杏黄酮阳性组降低乙酰 胆碱酯酶活性; 覆盆子乙酸乙酯组、覆盆子氯仿组、覆盆子全药组、银杏黄酮阳性组可明显升高老年大鼠脑组织总超氧岐化酶、过氧 化氢酶活性，明显降低丙二醛含量; 覆盆子乙酸乙酯组、覆盆子氯仿组、银杏黄酮阳性组可明显升高谷胱甘肽过氧化物酶酶活性。

结论: 覆盆子乙酸乙酯部位能提高自然衰老大鼠的学习记忆能力，因为其提高老年大鼠脑部胆碱能功能和减少脑部自由基损伤最 为明显，其次是氯仿部位，最后是全药部位。

关键词 覆盆子萃取部位; 学习记忆; Morris 水迷宫; 衰老

现代药理研究发现，覆盆子作用广泛，除延缓衰老外、还有对生殖系统的调节作用、抗氧化作用等。我们前期发现覆盆子氯仿提取部位和乙酸乙酯提取部位对 D-半乳糖联合氢化可的松造成的肾阳虚型痴呆大鼠和东莨菪碱所致的学习记忆障碍

大鼠有很明显的改善其学习记忆的作用［1，2］，但对自然衰老大鼠学习记忆功能的影响尚无文献报道。故本研究以自然衰老的大鼠为研究对象，观察覆盆子各有效部位对大鼠学习记忆能力以及脑组织中与学习记忆和衰老相关的酶及衰老相关代谢产物的影响，从而进一步研究覆盆子改善学习记忆的机制与物质基础。

1.材料与方法

1．1 试验药物  覆盆子购于江西省樟树药材市场，由江西中医药大学中药资源学科组刘庆华老师鉴定为蔷薇科悬钩子属值物掌叶覆盆子 Ｒubus chingii Hu 的未成熟果。经鉴定该药材质 量符合 2010 版中国药典要求。取覆盆子药材粉末 80% 乙醇渗 漉，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混悬，依次用氯仿、乙酸乙酯萃 取，得到覆盆子全药、氯仿、乙酸乙酯共三个部位，由江西中医药 大学药物分析室谢一辉教授制备，-20℃ 保存，临用前稀释至覆 盆子全药 

1．2g 生药 / ml、乙酸乙酯部位 1． 2g 生药 / ml、氯仿部位

1．2g 生药 / ml ; 阳性药银杏叶片，深圳海王药业有限公司，批号:20121004。

1． 2 动物 18 月龄 SD 大鼠，SPF 级，50 只，雌雄各半，体质重 ( 500 ± 20) g; 3 月龄 SD 青年大鼠，SPF 级，10 只，雌雄各半，体质 重( 220 ± 20) g。均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供， 许可证为: SCXK( 湘) 2009-0004。

 1．3 试剂 乙酰胆碱酯酶试剂盒，批号: 20140122，乙酰胆碱 转移酶试剂盒，批号: 20140119，谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒，批 号: 20130927，总超氧岐化酶试剂盒，批号: 20130926，过氧化氢酶试剂盒，批号: 20131012，丙二醛试剂盒，批号: 20130927，均购自南京建成试剂有限公司。

 1．4  仪器   Morris 水迷宫，北京众实迪创科技发展有限责任公司; 万分之一分析天平，Sartorius，德国; -80℃ 冰箱，Thermo，美国。

 1.5 方法 大鼠进行随机分成 5 组，分别为老年组、银杏黄酮 阳性组、覆盆子乙酸乙酯组、氯仿组、全药组，另设青年组( 为 3个月龄的 SD 大鼠) 。青年组和老年组灌胃生理盐水 1m1 /100g，乙酸乙酯组、氯仿组、全药组分别灌胃给予覆盆子相应萃取部12g 生药 / kg，银杏黄酮阳性组给予银杏黄酮 5． 785mg / kg，给药 容量 1m1 /100g，连续 1 个月。

1．5．1 定位航行试验 共 5 天，面向池壁将大鼠分别从三个不 同象限的入水点放入水中，记录其在 60 秒内寻找到平台所用的 时间，此是逃避潜伏期( escape latency) 。大鼠如果 60 秒内找不 到平台则由实验操作者牵引实验大鼠停留在平台上 10 ～ 15s，参与文献［4］进行。

 1．5．2  空间探索试验  实验第 6 天，撤除平台，任意选择 1 个

入水点将大鼠放入水中，记录其 60 秒内: 动物穿越虚拟平台的 次数; 空间探索试验中在原平台所在象限活动时间和动物在目 标象限( 原平台所在象限) 游泳路程。

1.5．3 乙酰胆碱酯酶、乙酰胆碱转移酶活性检测 水迷宫实验 结束后，取脑组织，进行组织匀浆，制成 10% 的匀浆液，检测乙 酰胆碱酯酶、乙酰胆碱转移酶活性，具体方法按试剂盒说明书进行。

 1．5．4 总超氧岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性 及丙二醛含量检测 取脑组织 10% 的匀浆液进行 总超氧岐化 酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性及丙二醛含量检测， 具体方法按试剂盒说明书进行。

1.结果

2．1 覆盆子各提取部位大鼠学习记忆的影响 ( Morris 水迷宫 法) 在水迷宫实验中: 与青年组比较，老年组大鼠逃避潜伏期 明显延长，穿越平台次数明显减少，提示老年组大鼠学习记忆 功能降低; 与老年组大鼠比较，乙酸乙酯组、氯仿组、全药组、银杏黄酮阳性组大鼠逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数明显增加。而各给药组中覆盆子乙酸乙酯组对大鼠逃避潜伏期有更显著的缩短，且穿越平台次数增加更明显，结果见表 1、2。

表 1  覆盆子不同萃取部位对自然衰老大鼠逃避潜伏期的影响 ( x珋± s，秒)