夫妇血型不合的孕妇产前免疫性抗体检测分析

【摘要】  目的: 探讨夫妇血型不合的孕妇免疫性IgG抗体效价异常率及临床意义, 观察凝聚胺法(MPT)检测孕妇血清中IgG抗A(B)及Rh血型抗D抗体的灵敏度和特异性。方法: 常规检测夫妇ABO及RhD血型, 对夫妇ABO及Rh血型不合的孕妇血清进行不规则抗体筛选及特异性鉴定; 用MPT法检测孕妇血清中IgG抗A(B)及Rh抗D抗体效价。结果: 在986例夫妇ABO血型不合的孕妇血清中, MPT法检出IgG抗A(B)效价≥1∶64者528例(53.5%), 传统试管法检出512例(51.9%), 两者比较无统计学意义(P>0.05); 在15例RhD阴性孕妇中检出抗D抗体11例(73%)。结论: 产前对夫妇进行ABO、 RhD血型及IgG抗A(B)和抗D效价检测, 发现异常及时进行治疗, 可减少母婴血型不合新生儿溶血病的发生率; MPT法检测IgG抗A(B)及抗D抗体效价, 操作简便, 结果准确。

【关键词】  血型抗体; 母婴血型不合; 新生儿溶血病; 凝聚胺法

新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn, HDN)是发生在胎儿和新生儿早期的同种免疫性溶血性疾病, 由于母婴血型不合, 母亲血型IgG抗体通过胎盘引起胎儿(新生儿)的红细胞破坏所致[1]。对HDN的预防主要依赖于孕妇的血型血清学检测指标, 我们从2000年起对优生优育保健门诊及住院孕妇进行ABO及RhD血型检测、 抗体筛选及特异性鉴定, 用MPT法对夫妇ABO或RhD血型不合的孕妇血清进行IgG抗A(B)及抗D效价检测, 对抗体效价异常者进行妊娠期干预治疗, 有效地预防或减少了母婴血型不合HDN的发生率。

　　1 对象和方法

　　1.1 检测对象 妊娠4～6个月以上, 孕妇ABO血型为O型, 丈夫为A型、 B型或AB型(Rh血型孕妇为RhD阴性, 丈夫为RhD阳性, 同时检测抗D抗体效价者15例), 共计986例, 其中首次妊娠者615例(62.37%), 多次妊娠者371例(37.63%), 年龄23～40岁, 均为我院优生优育保健门诊、 生殖医学中心就诊及住院患者。

　　1.2 检测试剂 抗A、 抗B及抗D血型mAb定型试剂血清由长春博德公司提供, 抗人球蛋白试剂和2?巯基乙醇(2?Me)由上海市输血研究所提供, 凝聚胺试剂盒由(台资)珠海贝索生物技术有限公司提供, ABO血型定型试剂红细胞, 系3名献血员新鲜红细胞洗涤后混合使用, 由本科血型实验室制备。

　　1.3 检测方法 抽取夫妇静脉血3～5 mL(不抗凝), 放37℃水浴中10 min, 离心分离血清与红细胞, 用盐水法检测ABO及RhD血型(丈夫仅做ABO及RhD血型检测); 用微柱凝胶法(MGT)对孕妇血清进行不规则抗体筛选, 抗体阳性者再进行特异性鉴定; 用MPT法对夫妇ABO及RhD血型不合的孕妇血清进行IgG抗A(B)及抗D抗体效价检测。①传统试管法: 取12×75 mm试管10支, 分别编号1～10, 每管加入生理盐水2滴(0.2 mL), 经2?Me纯化30 min的孕妇血清2滴加入第1管, 混匀后移出2滴转至第2管, 以同样操作稀释至10管, 最后1管吸出2滴弃去。每管的稀释度分别为1∶2、 1∶4、 1∶8、 1∶16～1∶1 024倍。于各管中分别加入洗涤后与被检者血型相对应3%～5%的红细胞悬液2滴, 置37℃水浴30 min后, 离心观察结果。从未凝集管开始用生理盐水洗涤3次, 吸净管口盐水, 加入抗人球蛋白血清1滴, 离心观察结果。②MPT法: 按上述操作倍稀释加入红细胞悬液1滴后, 每管加入低离子溶液0.7 mL, 再加凝聚胺溶液2滴, 离心弃去上清夜, 观察有无凝集(若无凝集需重做), 再加入悬浮液2滴, 1 min后观察结果, 凝集块散开者为阴性, 凝集块不散开者为阳性。孕妇血清中IgG抗A(B)抗体效价在1∶64以下者为正常, 在1∶64以上者为异常; 或夫妇RhD血型不合, 孕妇抗体筛选阳性, 或产生抗D抗体者判断为异常。

　　2 结果

　　2.1 孕妇血清IgG抗体效价异常捡出率 检测夫妇ABO血型不合孕妇血清抗体效价986例, 其中O型958例(97.2%), A型12例(1.2%), B型14例(1.4%)。在986例孕妇中检出IgG抗A(B)抗体效价异常者528例(53.5%), 其中首次妊娠23～30岁者243例(39.5%)多次妊娠31～40岁者285例(76.8%)(表1)。表1 夫妇ABO血型不合孕妇IgG抗A(B)抗体效价异常捡出率

　　2.2 Rh免疫性抗D抗体捡出率 在986例孕妇中检出RhD阴性15例(1.5%), 在15例RhD阴性孕妇中检出抗D抗体11例(73%), 抗D效价≥1∶32者4例(36.4%), 抗D效价≥1∶64者5例(54.5%), 抗D效价≥1∶128者2例(18.2%)。

　　2.3 MPT法与传统试管法对IgG抗A(B)抗体的捡出率 在986例夫妇血型不合的孕妇血清中, MPT法检出抗A(B)抗体效价≥1∶64以上者528例(53.5%), 传统试管法捡出512例(51.9%), 两者比较无统计学意义(P>0.05, 表2)。表2 传统试管法与MPT法检测IgG抗A(B)抗体效价的比较

　　3 讨论

　　血型抗体可分为“天然抗体”和“免疫性抗体”。“免疫性抗体”通常是IgG型, 可以经过胎盘进入到胎儿血液循环引起HDN。ABO、 RhD血型引起的HDN是由于母亲血液中存在与胎儿不相合的IgG性质血型抗体引起的同种被动免疫性疾病[1]。当孕妇血清中IgG抗A(B)抗体效价≥1∶64或RhD阴性孕妇血液中产生针对胎儿RhD抗原的抗D抗体时, 胎儿有受害的机会, 可能发生HDN。因此通常以IgG抗A(B)抗体效价≥1∶64作为临界值, 孕妇血清中IgG抗A(B)抗体效价≥1∶128时, 提示婴儿很可能受害, 孕妇血清中IgG抗A(B)抗体效价≥1∶512时, 胎儿几乎100%的受害, 临床上要进行预防性治疗[2]。该病可引起流产、 死胎、 严重贫血、 胆红素脑病、 智力低下等症状。有溶血病的新生儿如抢救不及时, 可发生胆红素脑病后遗症或引起死亡[3]。我院对孕妇为O型或RhD阴性, 丈夫为A、 B、 AB型或RhD阳性者, 在妊娠6个月时进行IgG抗体效价检测, 凡抗体效价在1∶64以上即开始进行治疗, 尤其对既往有不明原因流产、 死胎、 早产或生育黄疸患儿的孕产妇, 采取中药、 维生素C、 能量合剂或人血丙种球蛋白等治疗, 使孕妇体血液中抗体效价明显降低, 有效地预防了宫内发育迟缓, 减少了流产或死胎的发生。对出生后有溶血现象的婴儿及时给予蓝光照射、 输注白蛋白或血浆等治疗, 新生儿的溶血症状明显减轻。Rh血型抗体几乎都是由输入Rh血型不合的血液或母婴Rh血型不合的妊娠等同种免疫而产生, 本研究在15例RhD阴性孕妇血清中检出抗D抗体11例(73%)。国内自1998年《临床输血技术规范》要求对受血者常规检测RhD血型, RhD阴性患者输注RhD阴性血液以来, 由输血产生的免疫性抗D抗体已很少见, 多数是由于母婴Rh血型不合的妊娠免疫而产生, 因此产前对夫妇进行RhD血型及其抗体检测有重要的临床意义。

　　对HDN的预防, 主要依赖于孕妇产前ABO、 RhD血型鉴定及其抗体效价检测的血型血清学指标, 发现异常及时进行妊娠期干预治疗, 可以有效地预防和减少HDN的发生率[3]。因此选择一种灵敏快速、 操作简便、 结果准确、 重复性好的IgG抗A(B)及抗D抗体效价检测方法非常重要。以往常用的检测IgG抗A(B)及抗D抗体效价的方法, 是传统试管法, 操作繁琐、 费时, 限制了该方法的推广应用。MGT法是近年来兴起的一项免疫学检测新技术, 具有自动化程度高, 结果能在一定时间内长期保存等优点[4]。但由于MGT法检测的灵敏度较高, 若以传统试管法的诊断标准判断孕妇血清IgG抗A(B)效价检测结果, 将会导致对病情的评估过高。MPT法是一种快速检测免疫性IgG血型抗体的方法, 该方法大大缩短了抗原抗体的孵育时间, 既不需反复洗涤红细胞, 又不需特殊仪器设备, 检测成本比MGT法低, 而且倍比稀释后不需转移稀释液的标本管, 直接在原试管中进行检测, 操作方法简便快速, 因此该方法能很快在血型血清学检测中得到普及与推广。我们以往的实验结果[5]也证明, MPT法在检测血型IgG抗体的灵敏度上与传统试管法无明显差异, 而且与MGT法也有高度的相关性。在应用MPT法检测IgG抗A(B)或抗D抗体效价时, 要严格按试剂盒说明书操作, 加入试剂要摇匀并充分反应后离心, 观察结果时必须轻微振摇细胞扣, 以确保检测结果的准确性。

【参考文献】
  　　[1] 肖星甫. 输血技术手册[M]. 成都: 四川科学技术出版社, 1992: 156-159.

　　[2] 张和平, 冯杏彬, 申 华. ABO血型抗体效价的检测与母儿血型不合的疗效观察[J]. 中国优生与遗传杂志, 2003, 11(2): 60-62.

　　[3] 雷红霞, 牛 芳, 屠晓华, 等. 孕妇血型IgG抗体与新生儿溶血病关系研究[J]. 中国输血杂志, 2004, 17(5): 344-345.

　　[4] 杨世明, 田 榆, 张勇萍, 等. 微柱凝胶法交叉配血试验及其影响因素的探讨[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23(8): 780-781.

　　[5] 杨世明, 张勇萍, 杜润家, 等. 微柱凝胶抗人球蛋白法检测IgG抗体的实验研究与应用[J]. 临床血液学杂志(输血与检验版), 2007, 4(1): 21-24.ISSN1007-8738