比色法的发展历程
在20世纪30~60年代，是比色分析发展的繁盛时期，它广泛用于冶金、地质、金属材料中微量的金属和部分非金属元素的测定。随着光学仪器制造技术的发展，紫外-可见分光光度计应用日益普及，而酶标仪的出现使得比色法得到了更广泛的应用。酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计。目前较常用的比色法是微量比色法，即用96孔板替代比色杯,酶标仪替代分光光度计，操作简便，结果的准确性，稳定性和可重复性也更好。
比色法是以生成有色化合物的显色反应为基础的，一般包括两个步骤:首先是选择适当的显色试剂与待测组分反应，形成有色化合物，然后再比较或测量有色化合物的颜色深度。比色分析对显色反应的基本要求是:
①反应应具有较高的选择性，即选用的显色剂最好只与待测组分反应，而不与其他干扰组分反应或其他组分的干扰很小；
②反应生成的有色化合物有恒定的组分和较高的稳定性；
③反应生成的有色化合物有足够的灵敏度,摩尔吸光系数一般应在104以上；
④反应生成的有色化合物与显色剂之间的颜色差别较大，它们的最大吸收浓度之差一般应在60纳米以上。选用的显色剂可以是一种试剂，也可以是两种不同的试剂。如果待测组分与两种不同的试剂反应生成一种有色化合物，则称为三元络合物显色反应。这类显色反应常常具有更高的灵敏度和选择性，在比色法和紫外-可见分光光度法中应用非常普遍。选择适当的显色反应，研究最合适的反应条件和消除干扰的方法是比色分析的关键问题。溶液的酸度、显色剂的用量、温度、溶剂等对显色反应都有影响。
推荐
