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血清总胆固醇的测定实验——无水乙醇提取法

2019.3.31

实验方法原理	用无水乙醇提取血清中的胆固醇，同时沉淀蛋白质，向提取液中加入硫磷铁显色剂，胆固醇与浓硫酸及三价铁作用，生成稳定的紫红色化合物。与同样处理的标准样进行比色，求得其含量。
实验材料	胆固醇
试剂、试剂盒	胆固醇显色剂浓硫酸无水乙醇
仪器、耗材	722S 分光光度计刻度吸管
实验步骤	溶液配制： 1. 胆固醇标准贮存液（1 ml中含1.0 mg）：精确称取干燥重结晶胆固醇100 ml，溶于无水乙醇内（因不易溶解，可稍加温助溶），然后移入100 mg容量瓶中，加无水乙醇至刻度，贮于棕色瓶中，密塞瓶口置4 ℃冰箱中。配应用液时，应将其预先恢复至室温。 2. 胆固醇标准应用液（1 ml中含0.04 mg）：取上述贮存液4 ml 于100 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至100 ml刻度，贮存于棕色瓶中，放冰箱保存，使用时应先恢复至室温。 3. 铁贮存液：称取六水三氯化铁2.5 g，溶于87%磷酸内，并磷酸加至100 ml，贮存于棕色瓶中，此液在室温中可长期保存。 4. 显色剂：取铁贮存液8 ml，加浓硫酸至100 ml，此液在室温可保存6～8周。操作步骤： 1. 取小试管1支，准确吸取0.1 ml 血清于管底，加入无水乙醇4.9 ml，混匀，静置10 min，以2000 r/min 离心10 min。吸取上清液置另一洁净的小试管中备用。 2. 另取3支大试管标明“测定”、“标准”和“空白”并按下表配制。立即振荡15～20 次，置室温下冷却10 min，以空白管调零点，用550 nm 波长进行比色，测定各管光密度。 3. 计算展开