免疫分子与受体工程学—MHC-Ig二聚体检测抗原特异性T细胞
| 实验步骤 |
基 本 方 案 构 建 MHC I-Ig 二聚体材 料编码目的 M H C I 类分子的 c D N A 及合适的引物 M Z w I 和 X k I 限制性内切核酸酶及缓冲液（N e w England Biolabs) T A 克 隆 试 剂 盒（Invitrogen)，可选 p X I g 质 粒（可向作者索取） 10X T 4 D N A 连接酶缓冲液，添 加 5m m o l / L A T P I Weiss 单位/M1 的 T 4 D N A 连 接 酶（Life Technologies) L B 平 板 ，含 50M g/m l 氨苄青霉素和 30M g/m l 卡那霉素 L B 培养基，含 50jutg/m l 氨节青霉素 PvuI 限制性内切核酸酶及缓冲液 含有人类基因组 P2 微球蛋白基因的质粒（可向作者索取） 3m o l / L 乙酸钠， p H 5. 2 1 0 0 % 乙醇 J558L 细 胞（可向作者索取） x/R P M I -10 完全培养基，含 l O m m o l / L H E P E S (完全 R P M I -10/H E P E S ) 10m g / m l G 418 (Life Technologies) 14°C 水浴 微量离心机， 4°C 25c m 2 培养瓶 Bio-Rad Gene Pulsei•(或与其相当的电穿孔仪）及用于真核细胞0.4cm间隙的电 |
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