做HPLC的“鬼峰”知识
鬼峰，顾名思义，就是指在相同的色谱条件下，有时候出现，有时候消失的杂峰。
鬼峰产生的原因是多种多样的，查询了相关文献，结合本人以往的经验，来谈谈鬼峰的成因及应对策略，主要体现在以下几个方面：
1、流动相、样品及仪器中存在杂质。运行梯度洗脱时，由于开始时有机相比例不高，洗脱能力不强，部分杂质在便富集在色谱柱头处。随着流动相中有机相比例的提高，洗脱能力不断增强，一开始富集的杂质被洗脱下来，流出色谱柱而进入检测器，从而形成鬼峰。
2、流动相脱气不完全。当水和有机相在混合器中混合时，产生了气泡。
3、操作问题。
针对以上原因，给出的对策如下：
原因1，主要有几种情况：
1、试剂问题：
a）有机试剂：甲醇制备工艺相对乙腈来说较为简单，杂质含量也较少。但是由于甲醇紫外吸收范围比乙腈广，所以当使用紫外检测器时，尤其是波长较低时，尽量使用乙腈作为有机相，用甲醇的话漂移太大。而用作梯度色谱的乙腈质量要求较高，一般用进口梯度色谱专用乙腈能够很好的减少鬼峰的出现。
b）水：很多单位用自制蒸馏水作为水相，但是结果并不是很好。原因就是一些低沸点的有机杂质并不能够通过蒸馏除掉。有条件的尽量用HPLC级的纯水，没有条件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色谱条件比较严格也是有可能出问题的。
c）其它试剂：缓冲盐、TFA、EDTA等试剂也会对流动相造成很大的影响，尽量用纯度高的试剂配制流动相。
2、仪器问题：
a)液相的流动相管路被污染。长时间的使用含水量较高的流动相（尤其是加入缓冲盐的，细菌就容易在管路中滋生，细菌的代谢产物或是细胞碎片能造成鬼峰。
b)输送泵故障，造成系统压力不稳，从而产生鬼峰。
c)单向阀堵塞，造成系统压力不稳，从而产生鬼峰。
原因2，主要有以下几种情况：
1、在线脱气机脱气不完全。
2、两种流动相的有机相比例相差太大。例如A为100%水，B为100%乙腈。在梯度条件允许的情况下尽量减少两中流动相之间的差距，降低空气在两中流动相中溶解度的差异，从而减少气泡的产生。
3、流动相配置好后预先超声脱气。
原因3，主要有以下几种情况：
1、流动相配置过程中受到污染：
a)盛放流动相的容器或是量具受到污染。这种污染可能来自于洗涤剂、铬酸洗液或是其他实验人员用完后的残留杂质。流动相容器的清洗一般用干净的水+有机溶剂涮洗就行，过多的清洗步骤反而可能造成二次污染。有时流动相容器的塑料盖碎片都有可能是杂质的来源。
b) pH计。很多pH计以聚碳酸酯作为外壳，然而聚碳酸酯是可以溶于有机溶剂的，所以尽量使用玻璃pH计来测量流动相的pH。
c)滤膜。劣质的或者型号错误的滤膜往往是鬼峰出现的原因。
d)放置时间过长。流动相在空气中暴露时间过长，就可能吸收空气中的有机杂质，有时流动相中的添加剂，例如TFA，时间长了会氧化从而产生杂质。
2、样品稀释液与流动相极性或者pH相差太大。这也是导致鬼峰的原因之一，这种问题很有可能导致样品分为两个不同的阶段出峰，从而产生双峰或者多峰。
