细胞转染快准狠-GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法)、生物介导(病毒介导转染、原生质体转染)。
细胞转染方法 | 细胞转染原理 | 主要特点 | 适用类型 |
阳离子脂质体转染法 | 带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA 结合形成 DNA-脂质体复合物,然后通过细胞的内吞作用进入细胞 | ·操作简便 ·适用于各种裸露的DNA和RNA片段 ·适合转染各种细胞 ·对DNA浓度有一定要求 ·重复性好,但转染时需除血清 |
瞬时转染 稳定转染 所有细胞 |
DEAE-右旋糖苷法 | 带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸的磷酸基团形成带正电的复合物,复合物和带负电的细胞膜接触后而被细胞膜摄取 | ·有一定的毒性 ·操作简单,适用性广 ·重复性好,但转染时需除血清 |
瞬时转染 |
磷酸钙法 | 磷酸钙能够促进外源DNA和细胞的结合,磷酸钙-DNA复合物能够附着到细胞表面,并通过内吞作用进入细胞 | ·操作简单 ·对DNA浓度要求高 ·适用性有局限(不适用于原代细胞) |
瞬时转染 稳定转染 |
电穿孔法 | 高脉冲的电压破坏细胞膜,在细胞膜表面形成孔道,DNA通过孔道进入细胞 | ·适用性广,适用于质粒和几十kb的基因组片段 ·针对不同细胞要优化实验条件细胞 ·致死率较高 |
瞬时转染 稳定转染 所有细胞 |
显微注射法 | 利用显微操作系统和显微注射技术将 DNA直接注入到细胞中 |
·整合率较高,适用于工程改造和转基因动物的建立 ·操作复杂,且需要昂贵精密的设备 ·外源基因的整合位点和拷贝数无法控制,会导致片段缺失、突变 |
瞬时转染 稳定转染 |
逆转录病毒转染 | 通过病毒的膜蛋白和细胞表面的受体相互作用而进入细胞,利用宿主细胞酶自行转录复制合成DNA,并随机整合到细胞基因组中 | ·转染效率高,适用于难转染细胞转染利用病毒介导转染,外源基因整合较稳定 ·逆转录病毒只选择感染分裂细胞 ·容纳外源基因长度<8kb |
瞬时转染 稳定转染 特定细胞 |
随着分子生物学的发展,转染已经成为研究和控制细胞基因功能、实现基因调控的常规工具。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:高效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。
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