血管性血友病因子抗原(vwf:,ag)的检查过程
1）取一定量VWF∶Ag抗血清，用三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液稀释10倍，另取5g/L琼脂糖三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液隔水融化，冷却至56℃。然后将预温至56℃的稀释VWF∶Ag抗血清1∶60混合（视抗体效价而定），制成8cm×8cm、厚1.5mm的琼脂板，距玻板一边约2cm处打一排小孔，径孔3mm，孔间距为5mm。
（2）将琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，用滤纸作盐桥，用定量注射器吸取原血浆1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍数稀释的健康人血浆各10μl，分别加入抗体琼脂板小孔里。待检血浆样品用Tris-巴比妥缓冲稀释1倍后，加入各样品孔内。每孔加量均为10μl。
（3）电泳条件：电泳110～150V，电流约5mA/块板，时间18h，温度低于15℃。
（4）电泳完毕，取出凝胶板浸于4.4mmol/L磷钼酸染色液中20min以上，然后再放入生理盐水中浸泡10min，即可见明显火箭状沉淀峰，也可用氨基黑按常规方法染色。
（5）染色后，用双分规测量火箭电泳峰的高度（从加样孔上缘到峰顶），将标准血浆5个读数，通过回归方程得出标准曲线，然后求出各测定样品VWF∶Ag的含量，再乘以稀释倍数（×2），即样品实际浓度。表示相当于正常血浆的百分率。
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