由歧化作用测定的 PDHC 总活性实验
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品 30 ℃ 培养 15 min 后将样品放于冰中，然后加入 0.2 ml 2 mol/L 羟胺。 室温放置 10 min 后加入 0.6 ml FeCl3 试剂 离心 5 min，以缓冲液取代酶样品为空白对照于 546 nm 测量吸收值。 计算
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| 注意事项 | |
| 其他 | 试剂： 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.6 0.1 mol/L MgCl2（MgCl2·6H2O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml 水中） 0.1 mol/L 丙酮酸（丙酮酸钠，Mr＝110.0；110 mg 溶于 10 ml 水中） 0.01 mol/L 二磷酸硫胺（脱羧辅酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml 水中） 0.1 mol/L 二硫赤藓糖醇（DTE，Mr＝154.2，或二硫苏糖醇、DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中） 0.01 mol/L 辅酶 A（游离酸，Mr＝767.5，CoA·Li3，Mr＝785.4；23 mg 溶于 3 ml 水中） 0.1 mol/L NAD+（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中） 磷酸转乙酰酶（4000 U/ml） 乳酸脱氢酶（10 000 U/ml） 2 mol/L 羟胺（等量的 4 mol/L 氯化羟胺，Mr＝69.49 和 4 mol/L KOH，Mr＝56.11 混合） FeCl3 试剂 100 ml 5％ FeCl3（8.33 g FeCl3·6H2O，Mr＝270.3，用 0.1 mol/L HCl 补充至 100 ml） 100 ml 12％ TCA（三氯乙酸，Mr＝163.4） 100 ml 3mol/L HCl（1：3 的比例混合 HCl 和 H2O） 将三种溶液混合 展开 |
