载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪介绍
载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性或非线性的pH梯度中进行分离。
一、载体两性电解质的概念：
载体两性电解质是两性的，使它们在电泳柱中能达到一个平衡位置。
载体两性电解质可以作为载体。两性电解质不能用于等电聚焦，只有载体两性电解质，即具有好的导电性和好的缓冲能力的化合物才能用于等电聚焦。
载体两性电解质一般采用氨基酸和氨基聚合羧酸。
二、蛋白质的等电点（pI）：
蛋白质主要的特性是它的带电行为，在不同的pH环境中带不同数量的正电或负电，只是在某一pH时，蛋白质的净电荷为零，此pH即为该蛋白质的等电点（pI）。
蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成和构象，是一个物理化学常数。
可利用等电点差异进行蛋白质的分离分析。
三、理想的载体两性电解质应具备的条件：
1、易溶于水，在pI处应有足够的缓冲能力，形成稳定的pH梯度，不致被蛋白质或其它两性电解质改变pH梯度。
2、在pI处应有良好的电导和相同的电导系数，以保持均匀的电场。
3、分子量小，易与被分离物分开。
4、化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，也无变性作用，其化学组成不同于蛋白质。
四、载体两性电解质pH梯度的形成：
等电聚焦电泳的关键是pH梯度的形成。载体两性电解质pH梯度的介质是两性分子，在电场中迁移到自己的等电点后自然形成pH梯度。
五、工作原理：
蛋白质的等电点取决于其氨基酸的组成。组成每一种蛋白质或多肽的氨基酸的数目和比例不同，蛋白质的等电点范围很宽。在电泳仪中加入载体两性电解质，通直流电时，载体两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度。蛋白质进入时，不同的蛋白质移动到与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的蛋白质得以分离。
六、特点：
1、优点：
（1）分辨率高，区带清晰、窄。
（2）受溶质扩散影响小，可消除分子扩散引起的分离度下降。
（3）加样部位自由，重现性好。
（4）可测定蛋白和多肽的等电点。
2、缺点：
（1）载体两性电解质合成过程复杂，影响蛋白质点的位置，从而影响重复性。
（2）凝胶灌制重复性差，影响结果重复性。
（3）负极漂移现象使pH梯度不稳定。
（4）负极漂移现象使碱性蛋白质无法聚焦。
（5）需无盐溶液，不适用于在等电点不溶解或发生变性的蛋白质。
（6）载体两性电解质的加入对产品产生污染。
（7）操作过程中易发生凝胶脱水起皱现象。
七、注意事项：
1、pH梯度的选择。
2、添加中性载体两性电解质。
3、电流降到小且恒定时尽快结束电泳。
4、电泳结束后，检测凝胶表面pH。
5、蛋白质在pI处形成沉淀，添加表面活性剂。
八、应用：
分离对象只限于蛋白质和其它两性分子。
常用于同工酶的分离分析和pI测定。
