医学中扫描电镜的应用
一、基本技术平台
1.仪器:电子显微镜(electron microscope,简称电镜或EM)及制样设备:
①透射电镜(TransmissonEM, TEM):内部结构
②扫描电镜(Scanning EM, SEM):表面超微结构
2.样品制备技术或电镜技术(electron microscopy):超薄切片技术等
3.图像识别和处理技术 :诊断医师及技术员
1. 何为电镜?
电镜是使用电子来展示物件的内部或表面结构的显微镜。
观察对象:无机材料:材料、化工、采矿
有机材料:生物、医学、农学
电镜:实质上是一类工具,是显微镜的一种!但系大型、贵重、精密仪器,其原理、结构与光镜显著不同!
2.电镜基本原理
电子具有波粒二像性且其波长比可见光的波长短(1924年) ,短波长能极大地提高分辨率(光镜受可见光的波长限制,其分辨率约200纳米)。
高速运动的电子在电场或磁场的作用下,会发生折射,并且能被聚焦,聚焦即能成像。
电子射束取代可见光成为可能—1932年电镜诞生!
3.电子显微镜术的发展史
a.电子显微镜学:
①仪器: elcctron microscope 电子显微镜
②制样技术: elcctron microscopy 电镜技术
③图象识别和分析、处理技术
b. 电子显微镜学的发展:1933-目前分三个阶段
实验阶段 应用阶段 普及阶段 提高完善发展阶段 30-50年代 50-60年代 60-70年代 70-目前
58年我国生产了第一台电镜(南京光学仪器厂)
1979年我校电镜室成立,购买H—600透射电镜
4. 电镜种类
按使用目的分:
透射电镜(波谱仪、能谱仪、三维重构等)
扫描电镜(波谱仪、能谱仪)
超高压电镜
分析电镜
扫描隧道显微镜
原子间力电子显微镜
按用途分:
生物医学用电子显微镜
非生物医学用电子显微镜
按电子束发射方式分:
非场发射:电子枪
场发射:
5. 电镜与光镜的比较
由于光的衍射,LM 放大倍数到一定程度时就图像模糊,而电镜用电子照明,可更清晰。分辨率是衡量电镜性能的重要指标。人眼分辨率:约0.2毫米(mm) ,光镜分辨率:0.2微米(μm) ,电镜分辨率:0.2毫微米(nm)。光镜的计量单位是微米(μm),电镜的计量单位为毫微米(nm)和埃。如人体红细胞的直径约为7μm;人体细胞膜的厚度约为7~10 nm。
5.主要电镜技术
①超薄切片技术; ②负染色技术;
③SEM电镜样品制备技术;④冷冻超薄切片技术;
⑤电镜酶细胞化学技术;⑥免疫电子显微镜技术; ⑦电镜放射自显影技术;
⑧核酸大分子电镜样品制备技术;
⑨电子探针; ⑩电镜原位杂交技术。
拍照
• CCD相机的灵敏度约比通常的光学相机高40倍。
• 具有更多的自动化功能,如自动聚焦、自动消像散、自动拍照等
• 标准就具有图像数据库功能,测长、图像过滤功能等
• 具有较强的扩展功能,如三维重构等
• 由于CCD相机是和电镜是一体,因此可以通过手动控制板或PC机来控制CCD相机。在显示器上显示的图像
Featuresof HT7700 (Double-gap Obj. Lens)