生物样品的前处理技术--化学及生物化学法进行细胞破碎

主要是通过化学试剂或酶破坏细胞壁而使细胞破碎,常用的有如下一些方法。

①自溶法   将待破碎的新鲜生物样品存放在一定pH值和适当的温度下,利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏,使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度,动物样品常选在0~4℃,微生物材料则多在室温下进行。自溶时,需加少量防腐剂如甲苯、氯仿等以防止外界细菌的污染。

②溶菌酶处理   溶菌酶可用蛋清或微生物发酵方法制得,具有专一地破坏细菌细胞壁的功能。如用噬菌体感染的大肠杆菌细胞制备DNA时,采用pH8.0、0.1mol/L Tris-0.01mol/L EDTA制成每毫升2亿个左右细胞的细胞悬液,然后加入100pg～1mg的溶菌酶,37℃ pH8.0条件下保温10min,细胞壁即被破坏。溶菌酶作用专一性强,适用于多种微生物,人们较喜欢使用。除溶菌酶外,蜗牛酶、纤维素酶也常被选为破坏细菌及植物细胞之用。

③表面活性剂处理法   较常用的有十二烷基磺酸钠、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠等。