测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG 摩尔比值以及结合率。

　　⑴ 酶与抗体的活性

　　常用琼脂扩散或 免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以 蒸馏水浸泡1小时，将 琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的 颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在 显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。

　　⑵ 结合物的定量测定

　　一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用 紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：

　　酶量（mg/ml）=OD403×0.42

　　IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

　　对于过碘酸钠氧化法制备的 标记抗体量，按下列公式计算：

　　IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

　　已知酶量和IgG量后，即可计算出 标记抗体的摩尔（mol）比值。

　　HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

　　结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量

　　结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×100%

　　用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果最好。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时最好。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时最好。

　　ELISA方法的基本类型、用途及操作程序

　　根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。