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白喉棒状杆菌的微生物诊断介绍

2022.5.06

  临床上疑似白喉的病人不必等待检验结果,应立即给予抗毒素和抗生素治疗。但对于白喉流行期的首例病人应做微生物学检验予以证实。

  直接染色镜检

  用棉拭采取假膜边缘部渗出物,涂片,用奈瑟氏染色或美兰染色,镜检有无含异染颗粒的棒状杆菌。结合临床症状,可作出初步诊断。确诊必须通过细菌培养并进行毒力试验。

  凝固血清棉拭培养法

  将沾有马或牛血清的棉拭子放在无菌试管内,经8~10磅蒸气灭菌20~30分钟,并使血清凝固,且此凝固血清棉拭采取病人咽部标本,置37℃培养8~10小时后,直接涂片镜检。此法可作为大量检查时快速培养诊断之用。

  培养检查

  将棉试检材接种于鸡蛋斜面或Loeffer''''s血清凝固斜面培养基及亚碲酸钾平板培养基上,置37℃培养,待斜面或平板上长出典型的灰色疑菌落,挑取转种到鸡蛋呀或血清斜面进行分离培养,以供进一步形态染色或毒力试验鉴定。

  毒力试验

  1.豚鼠试验 取体重250g 豚鼠2只,其中一只试验前12小时,由腹腔注射白喉抗毒素250~500单位,供做对照。然后对照。然后各于皮下注射48小时的培养液2ml,若于2~4天注射抗毒素的豚鼠死亡,而对照豚鼠存活,便证明所试验菌株为有毒白喉杆菌。

  2.体外试验

  ①琼脂平板独立试验 又称E平板试验,将浸有白喉抗毒素的无菌滤纸条贴在含20%马血清的琼脂平板上,然后沿滤纸条垂直方向划线接种待测细菌,同时也接种已知产毒株和不产毒株做为对照。37℃培养48小时后,若待检菌株产生白喉外毒素,则在滤纸条和划线生长的菌苔交界外出现白色沉淀线。

  ②对流免疫电泳:将已知白喉抗毒素与待检菌培养液分置琼脂板两孔中,通电1~2小时。若两孔间出现白色沉淀线,表明待检菌能产生白喉毒素,常用于大样本量的检测。

  ③SPA协同凝集试验 将白喉抗毒素(IgG)预先吸附于金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)上,再加入待检菌培养物上清液。若有白喉毒素存在,即可与SPA-IgG结合,出现可见的凝集反应。此法更为简便,快速。

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