大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验
标记DNA的3‘末端
修复突出的3’或5‘末端
随即寡核苷酸引物介导
| 实验方法原理 |
选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关，标记DNA可稳定数月之久。
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| 实验材料 | DNA |
| 试剂、试剂盒 | dNTP |
| 仪器、耗材 | 水浴锅 |
| 实验步骤 |
1. 在20 μl 反应体积中，用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。
2. 加入20 μl Ci所需的［α-32P］标记下dNTP（400~800 Ci/mmol）和1 μl 5 mmol/l 3dNTP混合液。
4. 75℃加热10 min 以终止反应。如果需要，从标记DNA中去除未掺入的前体dNTP。
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