凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。 凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即: 蛋白质含量=含氮量/16%。

　　凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

　　原理

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　　蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量

　　1.有机物中的氨在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

　　凯氏定氮法

　　凯氏定氮法

　　反应式为：

　　2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）

　　2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中

　　反应式为:

　　(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

　　2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

　　3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，即得蛋白质的含量

　　反应式为：

　　(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

　　(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

　　试剂

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　　所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

　　2.1 硫酸铜。

　　2.2 硫酸钾。

　　2.3 硫酸。

　　2.4 2%硼酸溶液。

　　2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

　　2.6 30%氢氧化钠溶液。

　　2.7 0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。