呕吐毒素介绍

脱氧雪腐镰刀菌烯醇，又称为呕吐毒素，属单端孢霉烯族化合物。该毒素是F.镰刀菌霉（主要是 F.graminearum h 和 F.culmorum）的二级代谢产物，化学名为3α，3β，7α，15-四羟基镳草镰刀菌-9-烯-8-酮。这类真菌大多在低温、潮湿和收割季节，在谷物庄稼中慢慢生长。呕吐毒素一般在大麦、小麦、玉米、燕麦中含有较高的浓度，在黑麦、高粱、大米中的浓度较低。下表列出了世界各地各种商品呕吐毒素的存在情况。
呕吐毒素在世界各地各种商品呕吐毒素的存在情况

DON 常常与其他真菌毒素同存，从谷物和饲料中分离出来的 DON 的最高浓度已达92mg/kg。业已证明，发霉玉米中的 DON 对猪会产生毒性，对人产生食物中毒性白细胞缺乏症。动物饲料中呕吐毒素的中毒症状表现为：厌食、呕吐、消化道发炎、白血球下降、白尿、运动失调、内脏出血、中枢神经系统细胞变质，具有较强的细胞毒性，对血液及皮肤组织具有损害作用，细胞生长上表现出抑制蛋白质合成和 DNA 合成的作用。目前一些国家已制定了谷物中 DON 的限量标准，加拿大规定供人食用小麦中 DON 的限量标准为 2mg/kg，婴儿食品为 1mg/kg，美国还未建立卫生标准，但在 1982 年建议当供人食用小麦制品中 DON 含量为 2mg/kg 时应引起关注，我国也建议供人食用的谷物中 DON含量不得超过 1mg/kg。谷物中 DON 的快速测定方法有免疫亲和柱-荧光计快速分析法和酶联免疫吸附测定法。

免疫亲和柱荧光计快速分析法

(1)试剂与设备

①4-系列真菌毒素专用荧光计。

②均质器(250mL)。

③微量移液器(0.5mL,1.0mL)。

④涡流混合器。

⑤VICAM 呕吐毒素亲和柱。

⑥聚乙二醇(PEG),相对分子质量8000。

⑦色谱级甲醇。

⑧氯化钠。

⑨VICAM 呕吐毒素衍生液。

⑩VICAM 呕吐毒素标定标准溶液一套:2个蓝色、1个灰色、1个红紫色。

(2)样品的提取与过滤

①将样品粉碎好,称取50g,加入到均质杯中。

②加 5g 无碘盐(NaCl)、10g聚乙二醇800(PEG)和150mL 的纯水到均质杯中,高速搅拌1min,提取 DON。

③将注射器筒的下部密封好,用折叠式快速滤纸将滤液收集到注射器筒中,每个20mL。

(3)样品的制备与培养

①将 VICAM 呕吐毒素衍生液混匀(5～10s),用微量移液器分别取 500μL 加入到注射器筒中。

②将注射器筒仔细摇晃使溶液均匀。

4)柱色谱操作与测定

①将树脂上面的提取液、标准液和衍生液以1～2滴/秒的流速通过柱子。一定要保证样品和标准液均以同样的流速进行操作,这个操作步骤大约需要 10min,如果只用了 9min 说明流速太快,分析结果的准确性会受到影响。

②10mL 纯水以1～2滴/秒的流速清洗柱子。

③用10mL 纯水以1～2滴/秒的流速再次清洗柱子。

④用2mL HPLC 级的甲醇以1滴/秒的流速淋洗柱子,将淋洗液收集到测试管中。

⑤混合均匀后,将测试管放入荧光计中进行测定。

⑥检测限:0.50mg/kg,检测范围0～5.0mg/kg。