未分化的牙髓干细胞DPSCs和乳牙干细胞SHEDDE鉴定

实验方法原理 STRO-I是MSC的早期细胞标志分子之一，可用于鉴定DPSCs和SHED的未分化状态。STR0-1的单克隆抗体首先是作为能与人骨髓CFU-F细胞表面高表达的分子作用的试剂被大家所认识的。DPSC和SHED中含有大约10%〜20%的STRO-I阳性细胞。非常值得注意的一点，体外扩增后的DPSCs和SHED是不均一的群体，随着连续传代会逐渐的丢失它们的干性（STR0-1和3G5的表达丢失）。体外，在含有地塞米松、无机磷酸盐和L-抗坏血酸的培养基中，DPSCs和SHED能分化为成牙本质细胞和成骨细胞。

实验材料 DPSCs

试剂、试剂盒 灭菌MSC培养基成牙分化培养基胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶0.54mmol L(0.2%)EDTA 无Ca2+和Mg2+的Hank’s:平衡盐溶液溶解

仪器、耗材 培养皿冻存管

实验步骤

体外：

(a)用常规MSC培养基培养细胞，直到细胞达到完全汇合。

(b)更换为成牙分化培养基，每周换2〜3次培养基，持续培养6周。（汇合后，细胞可能容易从培养容器的表面脱离。因此，换培养基时要非常小心，避免细胞脱落。）

体内DPSCs的成牙和成骨分化：

(a)用MSC培养基培养，直到细胞到达90%汇合。

(b)用PBSA洗培养皿，洗3次。

(c)加足够体积的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。

(d)确定80%的细胞已从培养容器表面脱离，然后加MSC培养基。

(e)500g离心6min。

(f)倒掉上清，用MSC培养基重悬细胞。

(g)细胞计数。

(h)将重悬于MSC培养基的（2〜4)×106个细胞和载体混合，置于1.8mL冻存管中。

(i)37℃旋转孵育1h。

(j)无菌条件下，将混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我们通常使用NIH的bg-nu/nu-xid小鼠进行移植。

(k)在合适的时间点，收集移植物，组织学检测。（在HA/TCP载体和bg-nu/nu-xid小鼠体系中，8周的时间足够DPSCs和SHED形成充分的矿化基质。收集的时间点主要决定于体系。）