黑豆芽叶绿素含量的研究方法
黑豆芽，并不是我们通常所说的豆芽，比普通的营养成分含量高很多，尤其是里面的叶绿素含量，更是在很多蔬菜中占据榜首，这些都是经过一系列的研究实验证实，尤其是近代叶绿素仪使用的成熟，使得对黑豆芽中叶绿素的研究更加广泛，下面我们一起看下黑豆芽的叶绿素含量研究方法。
黑豆芽，俗称豆苗，口感鲜嫩，营养丰富，富含钙、磷、铁、钾等矿物质及多种维生素；而且还具有很高的药 用价值，其性微凉，味甘，有活血利水、清热消肿、补肝明目的功效。更为重要的是黑豆芽富含叶绿素。叶绿素分子结构与人体内的血液分子相似，非常易溶入红细 胞中，能抑制细菌、排出毒素，有“绿色血液”之称。
研究表明，豆芽中的叶绿素能分解人体内的亚硝酸胺，能够起到预防直肠癌等多种消化道恶性肿瘤的作用。因 此，研究黑豆芽的叶绿素测定提取方法，对于提高其品质和黑豆芽叶绿素深度开发具有重要意义。关于叶绿素含量测定方法使用较多的是Arnon法，但是 Arnon法需要把植物材料研磨和去残渣，提取时间长，工作量和操作误差大。20世纪80年代初张宪政提出了丙酮乙醇混合液浸提法，证明利用混合液进行叶 绿素浸提的可行性，进一步研究后发现，混合液法比传统Arnon法提取叶绿素效率高，稳定性好，并且洪法水等发现丙酮与乙醇在等浓度混合时提取效果最好， 明华等认为浸提法要优于研磨法，混合液浸提叶绿素比单独用丙酮或乙醇浸提快，叶片冷冻处理后，快速浸提能够缩短叶绿素浸提时间。目前，关于芽菜叶绿素提取 方法鲜见报道，本文以常规的Arnon法为基础，对研磨法和混合液浸提法进行了研究以探讨黑豆芽叶绿素含量测定方法。
1材料与方法
1.1 材料、仪器、试剂
黑豆芽购于市场；分光光度计；万分之一天平；丙酮、乙醇：分析纯，按体积比配制浸提液：95%乙醇，丙酮∶乙醇=1∶1，80 %丙酮分别用A、B、C 表示。
1.2 方法
预处理样品，取黑豆芽适量，用纱布或吸水纸吸干表面的水分，将子叶等剪成小于 2 mm 碎条， 混匀，分成2份。提取测量，一份在室温（25℃）下， 立即用研磨法和直接浸提法（A、B、C 3 种提取液）提取叶绿素。
其中浸提法，称取1g处理好的样品置于50mL容量瓶中加入相应提取液，定容，混匀，封口，置于黑暗条 件下直接浸提。待组织完全变白，分别在波长663、645、470 nm 下测定吸光度值。另一份用天平精准称取（1g，9 份），分别装袋，密封好，放到冰箱冷冻6h，取出以浸提法测定吸光度值。浸提法、研磨法、冷冻浸提法每个处理各重复3次。
1.3 数据处理
叶绿素含量的计算：Ca=12.7A663-2.69A645；式中：Ca为叶绿素a浓度， （mg/L）；Cb=22.9A645-4.68A663；式中：Cb为叶绿素 b 浓度，（mg/L）；C（a＋b）=Ca+Cb；式中：C（a＋b）为叶绿素总浓度，（mg/L）；叶绿素的含量（/mg/g）=[叶绿素的浓度×提取液 体积×稀释倍数]/样品鲜重；所有数据处理用SPSS13.0统计软件完成。
2结果与分析
2.1 黑豆芽叶绿素含量
各种方法提取结果见表1。
由表1可见，黑豆芽（不包括胚轴和胚根）叶绿素含量为0.1677mg/g（鲜重），a/b 为2.524。
2.2 不同提取方法的提取效果比较
研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种提取方法，对于叶绿素a、b 提取结果表现一致，以冷冻浸提法提取效果最好，其次为研磨法，再次为浸提法表2）。
浸提法提取效果最 差，一方面可能提取不完全，也可能在提取的过程中叶绿素有分解，相对冷冻浸提法，由于经过了冷冻过程破碎了细胞，提取完全而且提取过程快减少了叶绿素分 解，效果最好。研磨法在研磨、过滤等操作的过程中有损失，而且提取时间过程长造成弱光下叶绿素的分解，效果不及冷冻浸提法。叶绿素含量提取效果的单变量方 差分析，见表3。
由表3单变量方差分析表明，叶绿素 a Sig.=0.749，P>0.05，叶绿素 b Sig.=0 .145，P>0.05，即不同提取方法间差异不显著。
2.3 不同提取液提取效果
比较不同提取液提取效果比较，见表4。
由表4可见，不同提取液提取效果，对于叶绿素a、b 提取结果表现一致，以 95 %乙醇提取效果最好，其次乙醇丙酮 1∶1 混合，再次为 80 %丙酮。由表 2 单变量方差分析表明，叶绿素 a Sig.=0.000，P<0.01，叶绿素b表1 黑豆芽叶绿素含量测量结果Sig.=0.001，P<0.01，即不同提取液提取效果差异极显著。进一步进行不同提取液提取效果多重比较分析表明 （表5）。
由表5可知，除叶 绿素 b 丙酮乙醇 1∶1 混合提取液和 80 %丙酮提取液间差异不显著，其余各处理间差异显著。单种提取液 95 %乙醇提取效果最好，与明华等对玉米叶叶绿素提取研究结论一致，但乙醇丙酮1∶1混合液的提取效果不及 95 %乙醇，又与明华、李得孝结论不一致。
由表6对95%乙醇提取液的3种方法提取效果比较也可看出，提取黑豆芽叶绿素以95%乙醇为提取液，以冷冻浸提效果最好。
3 结论与讨论
1）研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种方法提取黑豆芽叶绿素，对于叶绿素a、b提取结果表现一致，以冷冻 浸提法提取效果最好，其次为研磨法，再次为浸提法，但不同提取方法间差异不显著。尽管 3 种方法提取效果差异不显著，但研磨法工作量大，提取时间长；浸提法提取值偏低；冷冻浸提法速度快且效果好，故在黑豆芽叶绿素提取中可采用冷冻浸提法。
2）3 种提取液提取黑豆芽叶绿素，叶绿素a、b提取结果表现一致，以95%乙醇提取效果最好，其次乙醇丙酮1∶1混合液，再次为80%丙酮，且3种提取液提取效果差异极显著。结合上文分析黑豆芽叶绿素以95%乙醇为提取液，以冷冻浸提效果最好。
3）本文在冷冻浸提中并未对冷冻处理的时间进行深入研究，在对混合提取液的研究中也仅对乙醇丙酮1∶1 混合比例进行了研究，有学者认为乙醇丙酮1∶2提取效果好等。因此，关于此方面的工作还需进一步研究。
