细胞质RNA提取实验操作步骤
由于RNA的种类来源很多,因而提取制备方法各异,一般有苯酚法,去污剂法和盐酸胍法,其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,向水相加冷乙醇后, RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质,且获得生物活性的RNA。
实验方法
基本方案
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 对于单层培奍细胞
3. 重悬细胞于375 μl 冰冷的细胞裂解缓冲液,并置冰浴5 min。
5. 加入2.5 μl 20 mg/ml 蛋白酶K,37℃温育15 min。
6. 加入400 μl 酚/氯仿/异戊醇抽提,在旋涡混合器上振荡用微量离心机离心,上清移至干净的离心管中,重复抽提1遍。
9. 用微量离心机4℃离心15 min 加人1 ml 75%乙醇/25% 0.1 mol/l乙酸钠(pH5.2)冼涤沉淀。 |