PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（三）

2.2 PCR-SSCP并测序分析发现X连锁遗传性铁幼粒细胞贫血家系ALAS2基因第5外显子基因异常
分析两兄弟及其父母、外祖父母的ALAS2基因，两兄弟ALAS2基因第5外显子的PCR扩增产物有与正常脐血不同的单链电泳条带，他们的父亲和外祖父有与正常脐血相同的单链电泳条带，而他们的母亲和外祖母同时由上述两种不同的条带。提示两患者的ALAS2基因存在异常，这一异常基因来自母系。（图1）测序表明两患者的ALAS2第5外显子有G514A的点突变，母亲为杂合子携带者。

将DNA序列测定结果在互联网上(www.ncbi.nlm.nih.gov/Blast)进行同源性分析确定两患者ALAS2第5外显子G514A点突变。

2.3 常规实时定量PCR在Gene Amp PCR System 2400 PCR仪用Taqman荧光探针能够检测ALAS2基因第五外显子点突变   在Taqman探针对此家系中六位成员DNA与二份正常男性脐血DNA分析与预期结果完全相符，即：所研究家系中二名患者、外祖母、母亲为阳性；家系中父亲、外祖父以及二份正常男性脐血、阴性对照均为阴性（图2）.

2.4 Taqman荧光PCR反应能够在PCR基因芯片上进行。

同样的样本在PCR基因芯片反应，结果与常规实时定量PCR反应的结果相符。
即：所研究家系中二名患者（1、2）、外祖母、母亲（3、4）为阳性；家系中父亲、外祖父（5、6）以及一份正常男性脐血（7）均为阴性；0号为阴性对照（图3）。表明Taqman荧光PCR反应能够在PCR基因芯片上顺利进行