微柱液相色谱法的优点和缺点
色谱柱由常规柱转为微柱后,随着柱内径的减少,液相色谱法分析呈现出以下一些优点:
1 可分析极少量的样品,特别适用于分析贵重样品和从活体采集具有生物活性的样品。
2 色谱柱中填充固定相的用量大大缩减,仅为常规的液相色谱仪的1%~10%,简化了填充方法,不仅降低了分析成本,也便于选择和更换固定相。
3 分析中流动相用量也大大减少,仅为常规的液相色谱仪的1%~10%,流动相对环境的污染减少,有利于保护环境。
4 微柱随内径的减小,缩减了固定相的用量,减少了柱阻力,使输送流动相的压力降低,不仅可使得分析时间缩短,还大大提高了柱效,可达10万~30万块/m塔板理论数。
5 通过微柱的流动相使用了很低流量,因此微柱GPLC易与质谱或核磁共振波谱构成联用系统,也易与其他HPLC柱组成二维HPLC偶联体系。
与上述诸多优点相对应,微柱液相色谱在使用发展过程,也表现出一些不足之处,它们也是实现微柱液相色谱理想分离结果所必须解决的关键技术问题,可归纳为:
1 微柱液相色谱丧失了常规柱具有的“无限直径“效应而保持高柱效的优势,并突出了柱外效应对降低柱效的影响。
2 由于微柱对样品容量的降低,使得常规液相色谱进样技术的应用受到限制。
3 由于进样量的减小,样品从微柱洗脱出的浓度很小,需使用高灵敏度检测器进行检测。
4 制作微柱的成本虽然降低,但制作一根高柱效、高选择性的微柱,仍需要较高的实验技能。
5 由于微柱的流动相仅使用每分钟几至几十微升的流量,需使用高精度、稳定性好、低流量的新型高压输液泵。
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