质谱沙龙第三十四期活动报道
基于芯片多通道纳喷质谱的液滴萃取表面分析（LESA）
华质泰科生物技术（北京）有限公司首席技术官刘春胜博士为大家作了题为《基于芯片多通道纳喷质谱的液滴萃取表面分析（LESA）》的报告，主要介绍了芯片多通道纳喷离子源（TriVersa NanoMate®），并详细讲解了其三大功能模式之一——LESA™（液滴萃取表面分析），以及它在AB SCIEX 质谱系统上的应用。
华质泰科生物技术(北京)有限公司首席技术官 刘春胜 博士
芯片多通道纳喷离子源
芯片多通道纳喷离子源（TriVersa NanoMate®）是Advion公司研制推出的最新的、基于芯片的纳升电喷雾离子化（Chip-based ESI）技术，它是集液相色谱（LC）、质谱（MS）、芯片纳升注射（Chip-based Infusion）、馏分收集（Fraction Collection）和液滴萃取表面分析（LESA）等优势于一身的新颖的液质联用（LC/MS）伴侣产品。不同于传统的单一模式的液质联用分析，TriVersa NanoMate®更适用于通量分析复杂的生物基质样品，以发掘更加丰富的化学和生物学信息。
芯片多通道纳喷离子源(TriVersa NanoMate®)
芯片多通道纳喷离子源（TriVersa NanoMate®）的原理是，通过成像技术和数码控制，精确定位样品采样点，用一滴溶剂对样品或组织进行表面微萃取，萃取液经由基于芯片的纳升电喷雾离子化(Chip‐based ESI)，进行串联质谱分析。它有三种功能模式：芯片注射分析，与LC/MS分析同步进行馏分收集，LESA™（液滴萃取表面分析）。TriVersa NanoMate®的ESI芯片是通过微型化释放质谱能量，这种微流控芯片包含刻蚀于硅晶片上的400个纳升电喷雾喷嘴，芯片的加工方法高度重现，确保了喷嘴的一致性，通过纳升级电喷雾喷嘴产生的电场使喷雾更有效、更稳定。芯片软件是TriVersa NanoMate®拥有知识产权的ChipSoft™，可以对各种参数（如进样体积、进样流速、温度和喷雾时间等）进行调节和控制，当喷雾失效（如发生喷头堵塞），仪器会自动移向下一个可用的喷嘴，保证样品电喷雾的连贯性，此过程在3秒内完成。
ESI芯片
ChipSoft™软件
LESA™（液滴萃取表面分析）
TriVersa NanoMate®现在有一种新的采样模式，能够通过浸渍直接从各种表面萃取样品，经纳升电喷雾离子化后来分析。液体萃取表面分析（LESA）由美国橡树岭国家实验室（ORNL）的Vilmos Kertesz 和Gary J. Van Berkel于2009年发明并申请ZL，该技术随后被授权给美国Advion BioSystems, Inc. (Advion) 公司，由Advion对其进行了技术改进和一体化、自动化设计，于2010年3月份完成了商品化，推向全球市场。LESA™可以更灵敏的分析更多的化合物，而且快速、简单、直接。它广泛应用于小分子和大分子分析，如薄的组织切片，TLC薄层板和其它平板分离介质，纸质干血斑，MALDI样品板进行互补的ESI分析，以及对任何含有可萃取物质的表面进行分析。
LESA™是怎样工作的呢？TriVersa NanoMate®首先从吸管架移取一个移液吸头，然后从溶剂瓶中吸取萃取溶剂，将吸取的溶剂推向样品板，使溶剂液滴与样品表面接触，溶剂自样品表面萃取分析物，将溶剂再次吸回枪头，使吸头紧贴于ESI芯片的背面，自然密封，施加电压和少许辅助气压，使发生电喷雾离子化。
LESA™工作流程示意图
LESA™与AB SCIEX质谱系统
美国橡树岭国家实验室（ORNL）开发的液体萃取表面分析（LESA）技术，使TriVersa NanoMate®能够对各种表面进行快速、直接的ESI质谱分析，该技术具有对用户友好、方法开发容易、快速简单、信息丰富和灵敏度高等优点。LESA™与AB SCIEX质谱系统配合使用，大大提高了其质谱性能，使之能够分析更多的化合物，获得更丰富的信息。另外，LESA™还可与安捷伦、赛默飞、布鲁克等厂商的质谱仪器兼容。
LESA™与AB SCIEX质谱系统配合使用
相关产品：芯片多通道纳喷离子源(TriVersa NanoMate®)
食品中过敏原的LC-MS/MS检测新方法
AB SCIEX 公司殷晓燕老师向大家作了题为《食品中过敏原的LC-MS/MS检测新方法》的报告，比较了食品中过敏原物质的检测方法，并介绍了AB SCIEX 独家率先发布的多种食品中过敏原同时进行检测的方法包。
AB SCIEX 公司 殷晓燕 老师
过敏原又称为致敏原或变应原，是指能够使人发生过敏的抗原，特点是接触过敏原一定时间后，机体致敏，反复接触后可出现过敏性症状，一般会逐渐加重。过敏原来源复杂，分为食物过敏原、接触性过敏原、有毒物质过敏、空气过敏原和注入性过敏原，食物过敏原又分为食物过敏蛋白质（植物性、动物性）、食品添加剂和转基因食品等。全世界8%儿童和2%成人对食物过敏，发达国家近20%的人受食物过敏性疾病的困扰，美国儿童6%、成人3.7%发生食物过敏，我国重庆5%儿童食物过敏，而且呈现上升趋势。
过敏原检测方法比较
过敏原广泛存在含肤质/谷蛋白的谷类、甲壳类、蛋类、鱼类、花生类、大豆类、牛奶类、坚果类、芹菜类、芥末类、芝麻类等食物中。PCR方法不是过敏原检测的首选方法，食品工业化加工通常采用/添加某些成分，可能是DNA与蛋白质分离，PCR方法可能产生危险的假阴性结果;ELISA利用抗体检测蛋白质，过敏原蛋白质结构在加工过程中会发生变化，导致假阴性结果。三种检测方法特点见下表。
| ELISA | PCR | LC-MS/MS | |
| 检测原理 | 蛋白质 | DNA | 蛋白质/肽（标志物） |
| 灵敏度 | 1-10ppm | 低 | 1-10ppm |
| 定量 | 是 | RT-PCR（semi） | 确证 |
| 假阴性/假阳性 | 是 | 重要标志物（DNA） | 无 |
| 专有程序 | 是（需要抗体） | 是 | 无 |
| 费时 | 是 | 是 | 一般 |
MRM在定量已知蛋白方面优点明显：检测灵敏度比传统的扫描模式高500-1000倍，特别适合低丰度蛋白质的鉴定——定性方面最显著的优点；定量的线性范围宽，>6个数量级，特别适合样品含量有显著差异的样品分析；扫描速度快，结合Schedule MRM软件，一次质谱扫描实验可以完成几百对MRM，因此可以同时检测几百种蛋白质的含量的变化；采用MRM方法定量已经成为小分子领域定量的黄金标准，技术成熟，使用简便，在蛋白质组学的应用现在正处于黄金时期，结合生物样本，容易出高档次文章。MRM之后，一定要进行MS/MS确证，目的是确认我们计算肽段面积所用的MRM峰，确实来自于该肽段，而不是其它肽段，因为一段肽段产生的碎片有几十上百个，二级谱图非常复杂，如果没有完整的MS/MS，极有可能产生假阳性。QTRAP系统是一种杂合了三级串联四极杆和线性离子阱的质谱仪，有独特的蛋白质定量流程MIDAS，有助于优化MRM离子对，消除干扰MRM离子对和去除假阳性MRM。
多种过敏原同时检测方法包
AB SCIEX 公司独家率先发布，多种食品中过敏原同时进行检测的方法包iMethod™。Cliquid™一站式整体解决方案平台，用于常规食品分析检验。简单的四步流程——选择检测项目、建立样品列表、定制报告、提交样品，可以轻松实现大通量进样分析工作。应用MIDAS™工作流程，殷老师检测了饼干、牛奶、小麦、鸡蛋、意大利面和面包中的过敏原，都获得了良好的线性和优异的重复性。
最后，殷老师对报告内容作了总结。AB SCIEX 开发的LC-MS/MS分析方法，可以分析几种主要食品（花生、牛奶、小麦和鸡蛋）中的过敏原，具有快速、稳固、灵敏和专一等特性；灵敏度与现行的ELISA和实时的PCR方法等相当，但是CV无需内标，特别是在低浓度时比ELISA方法更优异；LC-MS/MS方法可以同时检测多种过敏原，而每种ELISA方法只能检测一种过敏原；利用MIDAS™ workflow全扫描QTRAP®MS/MS图谱，同时进行多肽定性和定量确认，消除了ELISA和PCR方法固有的假阴性和假阳性结果；QTRAP®线性离子阱（LIT）由于MS/MS高灵敏度性能成为过敏原检测的最佳平台。
