蛋白质提取的六种方法
一、植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量（1g 样品加入 3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。
3、用离心机离心 8000rpm40min4℃或 11100rpm20min4℃
4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
这种方法针对 SDS-PAGE，垂直板电泳！
二、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积 3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上 1 小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含 0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上 1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置 30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离 心（15℃8000rpm 以上 1 小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在 4℃待用。
5、用 Brandford 法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含 10%TCA 和 0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g 尿素 0.2gCHAPS 溶于 3ml 灭菌的去离子水中（终体积为 5ml），使用前再加入1M 的 DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
三、组织：肠黏膜
目的：WESTERN BLOT 检测凋亡相关蛋白的表达 应用 TRIPURE 提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温 10min
离心：12000 g，10min，4 度，弃上清加入 0.3M 盐酸胍/95％乙醇：（2ml 每 1mlTRIPURE 用量） 振荡，置室温 20min
离心：7500g，5 min，4 度，弃上清重复 0.3M 盐酸胍/95％乙醇步 2 次沉淀中加入 100％乙醇 2ml 充分振荡混匀，置室温 20 min
离心：7500g，5min，4 度，弃上清吹干沉淀1％SDS 溶解沉淀 离心：10000g，10min，4 度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）
存在的问题：加入 1％SDS 后沉淀不溶解，还是很大的一块，4 度离心后又多了 白色沉定，SDS 结晶测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加 2X BUFFER，然后煮5－10 分钟，效果很好的。
四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根
1、200 毫克样品置于冰上磨碎
2、加 lysis buffer，离心，10000rpm，4 度，5min 取上清
3、重复离心 5min
lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
五、蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按 Davermal 等（1986）的方法进行。
100mg 材料剪碎后加入 10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用 液氮研磨成粉，加入 1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含 10mM 即 0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀 1 小时，4℃，15000 r/min 离心 15 min，弃上清， 沉淀复溶于 1.5ml 冷丙酮(含 10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀 1 小时，同上 离心弃上清，（有必要再用 80％丙酮(含 10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真 空抽干。
按每mg干粉加入 20 μ l （可调）UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2%Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度（温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min 离心15min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70 度保存
六、植物根中蛋白质的抽取
(1) sample, 液氮研磨
(2) 装 1.5 ml centrifuge 用 tube
(3) 加 1M KH2PO4+K2HPO4 700 ul
(4) 12000 rpm, 4 度, 10-15minite
(5) 取上层液，蛋白质就在里面
