植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法
DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。
实验方法原理 | CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70-75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。再经过氯仿/异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA沉淀分离出来。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 采集适量幼嫩叶片,用液N2研成粉末,0.4 g装入1.5 ml离心管中(-20 ℃预冷)。 |
注意事项 | 1. 尽量取材幼嫩叶片,如太老,酚类物质多,必须用10 mM的β-ME处理。 |
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