多糖多酚植物总RNA快速提取试剂提取水稻胚乳总RNA

2019年4月21日 15:29:37 来源: Everlab云端实验室
收藏到BLOG

实验概要

采用TAKARA的试剂提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!

实验步骤

1. 称量100mg的新鲜或者超低温冻结的植物RNA提取样品,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。

2. 向研钵中加入1000μL RNAiso-mate for Plant Tissue(TAKARA),将样品完全覆盖,然后室温静置,至样品完全融化,再用研杵继续研磨至裂解液成透明状。

3. 将匀浆液转移至1.5ml的离心管中,12,000g 4℃离心5min。

4. 小心吸取上清液,平均分至2个新的1.5ml离心管中。分别向上清液中加入等体积的RNAiso Plus(TAKARA),盖紧离心管用力振荡,待充分乳化后,室温静置5min。

5. 向混合液中加入1/5体积氯仿,盖紧离心管,剧烈振荡15s,待充分乳化后,室温静置5min。

6. 12,000g 4℃离心15min。

7. 小心吸取上清液至新的离心管中,加入等体积异丙醇,颠倒混匀后15-30℃静置10min。

8. 12,000g 4℃离心10min。弃上清,加入1000μL75%乙醇,轻轻颠倒洗涤沉淀,12,000g 4℃离心5min后小心弃去乙醇。

9. 室温干燥沉淀2-5min,加入适量RNase-free水溶解沉淀。
10. 1%凝胶电泳检测RNA质量后于-80℃保存备用。

注意事项

1. 注意RNase的污染!
2. RNA干燥时不宜太过,否则不易溶解!