色谱峰分叉原因汇总
01
样品或色谱柱污染
新是柱子刚开始使用时没有出现问题，在使用一段时间后出现数个色谱峰重叠在一起形成多个分叉，这时可以尝试用流动相冲洗柱子，冲洗时间宜慢不宜快。如果排除柱子问题，则要看样品有没有被污染等，混入了别的药物组分也会造成上面的现象。
02
溶剂效应
在反相液相色谱中，如使用
100%
有机溶剂或强溶剂大体积进样时，将使分析物过早被洗脱出色谱柱，导致峰变形。如需解决这个问题可以对分析物进行蒸发浓缩，使进样体积减少。或者进样溶剂改为用流动相稀释，即使进样体积较大也不会出现峰变形。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾。这时可以改变流动相的比例，提高水相可以延缓出峰时间来解决问题。
03
色谱柱过载
既然过载就可以试着减少进样量。当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现分叉或拖尾，总之峰型不好看。简单的解决方法就是减少进样量。在使用小体积色谱柱时这种问题表现得更为明显，所以色谱柱方法从常规250mm或150mm长色谱柱转化到体积较小的高效分析柱时，进样量要按照柱体积的减小的比例而减小。
04
色谱柱塌陷
由于柱塌陷引起的峰分叉，基本不可能修复，如果流动相8<PH<2或在色谱柱PH耐受范围临界点附近长时间使用，是比较容易造成硅胶填料溶解塌陷的，会看到色谱图的每个峰峰型都会发生变化，如峰拖尾，加宽或分叉。这时最好的方法就是换柱子了。
05
色谱柱两个接头没有安装好。
把两个色谱柱接头尽可能的连接入色谱柱。如果色谱柱在使用过程中发现每个峰的峰形都出现问题，先考察是否有连接问题，管线可能太长或太短等这种情况可能导致渗漏或峰分叉/拖尾，如果管线太长，密封圈位置不当，将发生渗漏，如果管线推出的距离不够，将会产生一段死空间，形成混合腔，导致柱外体积，使峰形变坏，如果您使用的是不同厂商的色谱柱，一定要确保使用正确的接头，并保证色谱柱末端接头位置正确。
06
色谱柱性能下降
在使用色谱柱时，会用其分析各种各样的目标物、使用各种流动相并分离不同的样品基质，经过长时间的使用，色谱柱会受到这些物质的影响发生一些微小的变化，从而引起峰分叉、拖尾或保留时间的改变。在使用新色谱柱时应该保留其初次测试样品的色谱图尤为重要，使用一段时间后进行比较就能发现性能上的变化。如果分离度下降导致不能进行良好定量，这根色谱柱就应该更换了。
07
柱前筛板部分堵塞
样品的前处理很重要，像血浆样品如果没有处理好长期分析时，如果没有保护柱或在线柱前过滤器，颗粒物和强吸附物很可能在柱入口筛板发生堵塞，同时伴随着压力升高，解决办法一般是色谱柱反冲。但色谱柱反冲需谨慎，弄不好柱子就废了。可以把连接液相的那端拆开，把过滤器取出来超声洗干净或者用流动相缓慢冲洗柱子。这样做问题一般能解决。
