维真稳转株构建流程（二）
平板挑取法
计数100个多克隆稳转株细胞，接种于一个10cm培养盘中；
注：尽量吹打均匀，防止细胞聚团。
过夜培养后，观察并寻找单个细胞的位置，并在盘底做标记；
培养培养2周；
注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。
待标记处的细胞扩增为肉眼可见的白点，在移液器尖端吸取一点胰酶，缓慢滴至细胞处，待细胞消化后，迅速吹打，将消化下的细胞转移至96孔板中，传代扩增，即为单克隆稳转株细胞。约需2-3周的时间。
注：每盘选取20个为宜，在消化时，需按照先消化边缘的，再消化中心的原则，防止克隆之间的相互污染。培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。
附3：单克隆稳转株
单克隆稳转株的荧光强度基本一致。
三、稳转株构建中的常见问题
1.支原体污染问题
由于轻度的支原体污染并不影响细胞的生长和增殖，故被许多实验室所忽略。但支原体易在病毒感染细胞后爆发，出现大量细胞碎片，甚至导致细胞死亡，导致稳转株筛选的失败。我们建议在稳转株构建之初，务必排除细胞及培养环境中的支原体污染。
2. 其他问题
除支原体污染之外，还有以下问题会经常出现于稳转株构建中。
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