影响ELISA实验的因素和对策（一）
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在科研上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。
下面将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下：
操作步骤：
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1 选择试剂：
2 标本收集与保存：
3 试剂使用中的准备工作及注意事项：
4 加 样：
5 温 育：
6 洗 板：
7 显 色：
8 终 止：
9 读 板：
10 全过程：
11 ELISA实验的结果判断和数据分析
选择试剂：
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
参考准备ELISA实验的正确步骤#ELISA实验的事前准备工作一
标本收集与保存：
避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本；
2-8℃下，标本可放置24-48小时，长期保存需放置-20℃下。
请避免反复冻融。
具体请参照：
ELISA实验标本的采集与处理：
ELISA实验标本的保存：
试剂使用中的准备工作及注意事项：
试剂盒中会有提示，一般需要准备的有：
洗涤液；用前配制；有的试剂盒会标明，配好的4度下一般可以放一个月；如果没有标明，尽量用新鲜的，不要多配制。
显色液（有A液和B液的），用前15分钟配制；
标准品：有的试剂盒中标准品是已经配制好的，4度保存；有的是要现配制的；按照说明书操作；
浓缩生物素结合的二抗和HRP：如果需要配制，试剂盒没注明配好可以保存多久的话，尽量现配现用（用前15分钟配制）；
原则是：
试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话，应该现配现用；不要怕麻烦；
还有，小瓶的管子开盖前要离心，以免盖子上粘连以後总量不够。
加 样：
室温温育的试剂，特别是温育时间比较短的实验操作的试剂，加样对数据的影响比较大。特别要注意加样问题。
不好的操作原因：
不会正确使用加样器；
血清或血浆标本分离不好即进行加样；
手工操作中，加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；
加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外；
解决办法：
熟悉加样器的使用，在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确；
试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清後再检测；
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；
加样後及时放入孵箱；
加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；
如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他後处理仪器加酶试剂；
标本较多时，请分批操作。每次加样最好在两到三分钟内完成。加标本时最好三排一加。每次加完样进行计时；
