2．2 还原样品中巯基的影响
图2、图3分别为肝细胞样品和牛奶样品加还原剂后加与不加巯基保护剂的电泳结果比较．与图2(a)、图2(b)比较，图2(c)斑点数量明显减少，还出现一些假斑点．与图3(a)比较，图3(b)点2和3消失，也出现4和5两个假斑点．斑点减少是因为加还原剂打开二硫键后形成的巯基若未及时保护，会很快重新形成二硫键，出现假斑点是因为二硫键打开后部分巯基交叉形成新的二硫键．因此，若使用还原剂处理样品，应及时加入巯基保护剂，以避免斑点减少并出现假斑点．以往样品经还原处理后，不再加试剂保护形成的巯基，一般认为这种做法对蛋白的电泳分离效果并无影响，但经本次试验可明显看出样品还原处理后保护形成的巯基是十分必要的，否则很有可能导致错误的分析结果．

2．3 第二向SDS—PAGE中分离胶厚度的影响
袁泉等人曾使用固定pH梯度(IPG)凝胶双向电泳系统观察同一个样品在不同大小的第二向凝胶系统(大型和中型凝胶)的双向电泳图，认为分离效果有较大差异 ．笔者采用的小胶是300 V下电泳45 min，大胶是120 V、16～24 mA下电泳165 min，染色与脱色时间大胶均长于小胶，小胶电泳电压远高于大胶因而电泳时间明显缩短，小胶比大胶薄因而染色和脱色时间少于大胶，并且分离效果优于大胶，蛋白斑点更清晰，电泳效果见图4．虽然胶变大有利于蛋白的分离，但胶的厚度变大，横向扩散效应比薄胶明显，与胶的长度相比，胶的厚度成为影响分离效果的主导因素，因而厚胶分离效果不如薄胶．



2．4 载体为琼脂糖时对分子量10万以上蛋白的分离鸡卵黄免疫球蛋白IgY是大分子量蛋白，分子量约为15×105 Da，等电点为5．4—5．5．由于其分 子量较大，以聚丙烯酰胺为等电聚焦电泳载体无法将其区分．而改用琼脂糖凝胶作为等电点电泳的分离载体，使传统上用聚丙烯酰胺为等电聚焦电泳载体无法分离的大分子蛋白(M，>100 kDa，如鸡卵黄免疫球蛋白(IgV))的点在双向电泳图上得到了确认，说明以琼脂糖为载体可以分离100 kDa以上的蛋白质，这是因为琼脂糖凝胶孔径比聚丙烯酰胺大．电泳效果见图5．

参考文献：
[1] Kortt Michael A，Bootman J Lyle．Phytotherapy in treatment of benign prostatic hyperphsia：a critical review[J]．Cl／nical Thempeutics，
1996，18(6)：1 227—1 241．
[2] 郭应禄．泌尿外科专集(一)：前列腺增生及前列腺癌[M]．北京：人民卫生出版社，1998．1—24．
[3] 蒋晟，廖清江．甾体5a一还原酶抑制剂的研究进展[J]．中国新药杂志，20OO，9(7)：438—442．
[4] Eli Lilly，Company．LY 191701：type 1 steroid5a—reductase inhibitor treatment ofandrogenic alopecia[J]．DrIlgs Fut，1995，20
(2)：144—147．
[5] 孙祖越，吴建辉，屠曾宏．一个简捷的甾体5a一还原酶抑制剂体外筛选模型[J]．上海实验动物科学，2002，22(4)：
204—2O8．
[6] 孙祖越，郑维君，王晓麟，等．甾体5a一还原酶活性的新测定方法[J]．中华内分泌代谢杂志，1998，14(3)：2O6—
207．
[7] 董晓燕．生物化学实验[M]．北京：化学工业出版社，2003．
[8] 崔毓桂，张桂元．正常成年男性5a一还原酶活性的测定[J]．生殖医学杂志，1995，4(1)：11—15．
【9J lmperato—McGinley J，Sanchez R S，Sponger J R，et ．Coml~ son ofthe e~ects ofthe 5 alph —reductsse inhibitorfinasteride
and the antiandrogen thtamide on prostate and genital diferentiation：dose—response studies[J]．Endecrinology，1992，131(3)