离心机-离心条件的选择
离心条件的选择:
速度:颗粒小用较高速度,颗粒大则用较低速度。有的物体如细胞,有囊膜的病毒,转速太高会变形或失活,要较低转速和较长时间。
温度:温度低些样品不易失活。但并非越低越好。温度太低盐易析出或结晶,无法离心。温度太低蔗糖溶液粘度迅速增加,形成很大的阻力。使沉降过程变得很难进行离心管也会发脆,样品也容易成团,影响区带的形成。常用的离心温度是10-15℃。
(1) 直接吸取
用长针头注射器直接吸取所需的区带.该法适用于只有一、二条带的情况。当形成的带子很多,或者带子很弱,或要对整个梯度进行分析时不适用。
(2) 顶替法
把很稠很重的介质(如60%-70%)的蔗糖液慢慢注入离心管底部,将离心管中的溶液顶替出来。
(3) 穿刺法
先用一块胶布贴在离心管底部,再用针头刺穿离心管的底部,使液体顺针头逐滴流出,再分部收集。
(4) 虹吸法
用一根很细的管插到离心管的底部,将溶液导出分段接收,要注意防止已分开的区带被扰乱。
A. 通过一针管将密的液体泵到梯度的底部,然后将一专门的盖帽导出。
B. 可穿刺离心管底,使梯度滴出,将一具有合适阀门的盖帽放到离心管顶可控制替换的速度。
C. 可在离心管顶装一盖帽,泵入空气或轻的液体,通过插到离心管底部的针管将梯度替换出。
离心后转头和离心管的处理:离心结束后,离心管可用有机碘,新洁尔灭,过氧乙酸等消毒,有些管可以高压灭菌(如PP,PC,PF见前节介绍离心管特性)。
转头可用清水洗净,禁止用热水(会退火,影响强度),腐蚀剂和硬刷子(破坏保护层,失去平衡精度)。尽快擦干放好,严禁碰撞。
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