玉米赤霉烯酮快速分析技术
1、简述
玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），又称 F2 毒素，是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌、尖孢镰刀菌、黄色镰刀菌、串珠镰刀菌、木贼镰刀菌、燕麦镰刀菌、雪腐镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物，是一种雌激素真菌毒素。化学名为6-（10-羟基-6-氧基-1-炭烯基）β-雷琐酸-μ-内脂，是一种白色的结晶，分子式为 C18H22O5，相对分子质量为318；熔点为164～165℃；紫外线光谱最大吸收为236nm，274nm 和316nm；红外线光谱最大吸收为970nm。纯的玉米赤霉烯酮不溶于水、二硫化碳和四氯化碳，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯、乙腈和乙醇，微溶于石油醚（b.p.30～60℃），在紫外线照射下呈蓝绿色。
玉米赤霉烯酮首先从赤霉病玉米中分离，有15种以上的衍生物，其主要存在于玉米和玉米制品中，小麦、大麦、高粱、大米中也有一定程度的分布，ZEN 主要污染玉米、麦类、谷物等。
玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽特别是猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来经济损失。饲料中1mg/kg 的玉米赤霉烯酮就会使动物产生雌性化，更高的浓度（50～100mg/kg）将会对怀孕、排卵、移植、胎儿的发育、新生动物儿的生存力产生不利的影响。
目前玉米赤霉烯酮的测定方法有免疫亲和柱荧光计法、薄层色谱法、气相色谱法、高压液相色谱法等。下面介绍的是免疫亲和柱荧光计快速测定法。
2、免疫亲和柱荧光计快速测定法
①试剂与设备
（1）4-系列真菌毒素专用荧光计。
（2）均质器（250mL）。
（3）微量移液器（1.0mL）。
（4）涡流混合器。
（5）玻璃纤微滤纸（1.0m）。
（6）VICAM 玉米赤霉烯酮亲和柱。
（7）聚乙二醇（PEG），相对分子质量8000。
（8）色谱级甲醇。
（9）色谱级乙腈。
（10）氯化钠。
（11）VICAM 玉米赤霉烯酮衍生液。
（12）VICAM 真菌毒素通用标定标准物。
（13）0.1％吐温-20/PBS 缓冲液。
②标定值的设置：
使用 VICAM 真菌毒素通用标定标准物
仪器
绿色
红色
黄色
Vicam4 系列真菌毒素专用分析仪
-0.05
0.45
0.20+/-0.03
③试验准备
（1）标定荧光计。
（2）确认延时时间为300s。
（3）配制1倍0.1％吐温-20/PBS缓冲液（每月配制一次，或根据需要配制）。
（4）配制提取液：乙腈/水（90:10，体积比），或者甲醇/水（80:20，体积比）。
（5）试剂空白试验（1mL 甲醇＋1mL 显色剂置于测试管中），荧光计读数应为0。
（6）空白试验（2mL 纯水置于测试管中），荧光计读数应为0。
④样品提取
（1）称取20g 磨细的样品，2g 氯化钠，置于搅拌杯中。
（2）加入50mL 甲醇/水（80＋20）溶液，或者乙腈/水（90＋10）。
（3）盖上搅拌杯的盖子，高速搅拌2min。
（4）取下盖子，将提取物倒入折叠式滤纸上，滤液收集于干净的容器中。
⑤提取物的稀释
（1）移取10mL 上步的滤液，置于干净的容器中。
（2）用40mL 1倍0.1％吐温-20/PBS 缓冲液稀释，混匀。
（3）将上步稀释液通过玻璃微纤维滤纸（1.0μm）过滤，滤液收集于玻璃注射器筒中量取10mL。
⑥分离柱色谱操作与测定
（1）将上步10mL 滤液（10mL 相当于0.8的样品），以1～2滴/s 的流速全部通过 Zearala Test 亲和柱，直至空气进入到亲和柱中。
（2）将10mL 0.1％吐温-20/PBS 缓冲液以1～2滴/s的流速通过亲和柱。
（3）将10mL 纯水以2滴/s的流速通过亲和柱，直至空气进入到亲和柱中。
（4）用1.00mL HPLC 级的甲醇以1滴/s的流速淋洗亲和柱，将所有样品淋洗液（1mL）收集于玻璃测试管中。
（5）将1.00mL ZearalaTest 显色剂加到测试管的淋洗液中。混匀后，将测试管置于已标定好了的荧光计中。300s 后，读数。
（6）检测限：0.10mg/kg，测定范围0～5.0mg/kg。
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