关于HLA分型的DNA分型方法介绍
DNA分型主要分为两种方法:基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法,常用的方法大致可分为大类:
①限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism,RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差异在限制性内切酶作用下将被切成大小不同的片段,其电泳迁移率也发生差异,经电泳分离、印迹、探针杂交等一系列技术处理来分析目的基因。
②聚合酶链式反应寡核苷酸探针杂交方法PCR-SSO(sequence specifie oligonucleotide,SSO)。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针,通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。
③聚合酶链式反应单链构象多态性分析(PCR -single strand conformational polymorphism,PCR-SSCP)。PCR产物经变性为DNA单链,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,只有一个核苷酸发生变异,其电泳迁移卒就会改变,从而进行多态性分析。
④DNA序列测定(sequencing)。能直接读到目的片段核苷酸的完整序列,重复性好,分辨率高,自动化程度高,是HA分型最直接、最精确、最可靠的方法。常用于对新发现的HLA特异性进行DNA序列分析。
⑤特异性引物PCR技术(PCR sequence -specific primer,PCR-SSP)。采用特异性等位基因引物作PCR,扩增得到的DNA片段因分子量的不同而被凝胶电泳方法区别。
以上HA分型技术各有其自身的特点:DNA测序测定的分型方法最直接、最精确、最可靠,常用于对新发现的HA特异性进行DNA序列分析,所需设备昂贵;采用PCR-RFLP、PCR-SSCP技术进行HLA分型则敏感性和精确性较高,检测时间比较短,但方法学复杂;PCR-SSP和SSO技术具有高特异性与敏感性、简捷、快速、结果容易判断,是比较理想的高效检测配型手段,其有相当的应用前景。