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专访AOAC委员,探究食品微生物检测新方法

2018.8.29

——专访布鲁克•道尔顿微生物全球发展经理Daniele Sohier博士

  分析测试百科网讯 2018年,我国食品、药品、化妆品等工业领域的国家监管体系发生重大调整,工业微生物安全监控模式与技术体系创新计日可待。据统计,微生物污染连续多年是影响全球食品安全、药品安全的首要因素。为把握工业微生物安全控制领域法规标准动向,探讨新形势下国内外微生物检测、鉴定、分型、溯源、评价前沿技术与应用,助力工业企业应对微生物安全共性挑战,中国工业微生物菌种保藏管理中心组织举办第七届“工业企业微生物安全控制技术与实践研讨会”。在此次研讨会召开前夕,分析测试百科网有幸采访到布鲁克全球发展经理Daniele Sohier博士,邀请Sohier博士以自身的经历,畅谈布鲁克在食品微生物检测中发挥的作用。

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从左至右:布鲁克•道尔顿微生物与诊断部门亚太区总监石工一博士,工业微生物全球发展经理Daniele Sohier博士,应用工程师祝坤

长期为国际食品和微生物标准化和认证组织工作

  在2016年加入布鲁克之前,Daniele Sohier博士一直在第三方实验室从事食品和工业微生物检测方面的工作。作为ISO和AOAC专业组委会的召集人,Sohier博士长期从事标准认证、制定和比对工作。她还参加欧洲MicroVal认证组织,以技术专家委员会的身份进行标准方法的建立和比对工作。作为明年IAFP欧洲轮值主席,Sohier博士正在负责即将于2018年11月在上海举办的亚洲年会的组织工作。

  Sohier博士也向我们普及了几大组织的特点。AOAC和ISO专业组是全球最重要的标准委员会,主要工作是组织行业专家为相应的行业、协会制订分析检测标准,并为新技术(如MALDI Biotyper)的准入提供参比准则。另外他们也组织或策划新技术和新方法的认证工作。ISO和AOAC同为制定标准,只不过ISO认证的工作由其它机构如MicroVal或AFNOR等完成,而AOAC则是通过下属AOAC研究中心(AOAC Research Institute)来完成。IAFP是一个关注食品安全的国际性组织,注重组织和筹划专业性会议,进行相关学术和法规方面的交流。今年七月在美国盐湖城举办的IFAP年会,参会人数高达3,600多人。IFAP在迪拜和拉丁美洲也举办了相应的区域会议,2018年11月在上海的IAFP亚太区会议正在积极筹办中。

  相关名词

  ISO:International Organization for Standardization 国际标准化组织

  AOAC:Association of Official Analytical Chemists 美国分析化学家协会

  MicroVal:国际认证机构, 用于验证和批准食品及饮料微生物分析的替代方法。MicroVal 为 ISO 16140-2:2016,ISO/DIS 16140-6:2017和其他验证标准提供验证和认证。MicroVal证书表明,专有方法同样等价于 《国际标准化》 参考方法。

  IFAP:International Association for Food Protection国际食品保护协会,由4,000多名食品安全专业人士组成的协会, 致力于食品安全全球化推进, 向全世界的食品安全专业人员提供论坛, 交流有关保护食品供应的信息。

  AFNOR:法国标准化协会

用标准化推动MALDI Biotyper的应用

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布鲁克 MALDI Biotyper

   “自2016年加入布鲁克以来,我的工作重点是食品和工业微生物应用,而重中之重是确保Bruker在食品和工业微生物的分析检测技术能够符合AOAC和ISO的标准。” Sohier博士谈到了MALDI Biotyper通过标准和认证工作的意义:首先,如何证明新技术是与现有技术相似甚至更好,我们需要提供更多的信息。其次,虽然AOAC和ISO所制定的标准具有相似性,但不同国家对AOAC和ISO的标准选择也有不同偏好。

  AOAC:收录两项方法,获评年度最佳方法

  “我们的工作进展非常迅速。我们从2017年5月开始进行AOAC认证,2017年9月至10月进行了不同实验室间的检测结果比对;2017年12月这两种方法最终被收录为OMA (Official Methods of Analysis) 方法。我们认证的微生物范围之广,内容之多,在AOAC的认证历史中尚属首次。首先,这种方法不仅能够准确鉴定几种常见控制菌,如沙门氏菌、克罗诺杆菌、李斯特菌;同时通过Bruker庞大的数据库也可以实现其他革兰氏阴性及革兰氏阳性细菌的鉴定。”Sohier博士说到。

  今年布鲁克MALDI Biotyper两项检测方法获得AOAC国际组织授予的2018年“AOAC年度最佳方法”。

  通过ISO 16140-Part 6 标准

  布鲁克也联合MicroVal进行基于ISO 16140-Part.6方面的标准方法认证。虽然还没完全定稿,但布鲁克已完成相应的方法比对和认证等工作。

  ISO 16140-Part 6是近年来新建立的微生物检测标准,“在这个条款正式发布前,没有其它检测标准条款与其类似,目前选择ISO方案作为检测标准的国家非常期待这个方法正式发布”,Sohier博士表示。此前,布鲁克与MicroVal进行合作,通过与不同国家的食品监管机构、厂商、第三方实验室以及相关使用者共同建立符合ISO 16140-Part 6的MALDI Biotyper的菌种确认方法。Bruker是第一家通过ISO 16140-Part 6的MALDI检测方法的仪器生产商。“我们已得知另一个厂家也开始联系MicaoVal做认证,因此布鲁克在此方面算得上是开了先河。”Sohier博士说。

  MALDI Biotyper检测方法通过ISO 16140-Part 6认证后,布鲁克的合作伙伴可以使用这项便捷的检测方法进行菌种确认。同时,Sohier博士也表示,布鲁克非常自豪地以先驱者的身份开拓了一条快速检测菌种的方法,希望未来布鲁克能够开发出更多的快速检测金标准。

  OMA认证的挑战

  回顾方法认证过程中的挑战,Sohier博士谈到两点,“第一点是李斯特菌的鉴定方法,第二点是组织大规模不同实验室进行比对的工作”。面对第一点挑战,目前世界上普遍方法采用蛋白质提取法进行此类菌种鉴定,蛋白提取法工作量大,花费时间长。布鲁克采用全新的subtyping(分型)技术,无需提取蛋白质,直接用涂抹法即可快速鉴定李斯特菌。面对第二点挑战,布鲁克共组织了四项比对试验,两项在欧洲做,两项在美国做;每项对比试验邀请14家实验室参与。“如此大的工作量我们事先也没有太多的思想准备,但最后我们发现,比对中错误的结果全部来源于传统方法,而用MALDI Biotyper技术的结果都是正确的,这个结果让我们倍受鼓舞。”Sohier博士兴奋地说。

  PTM与OMA的区别

  Sohier博士表示,PTM(Performance Tested Method)虽然也属于AOAC认证,但其分析方法的提供者是仪器厂家本身,而且PTM不需要进行室间评估,只需要单一实验室提供比对结果即可。PTM主要的实验室数据可以由厂家提供,极少部分实验数据由专家实验室验证。而OMA认证由两部分组成,实验室间预比对和比对实验,其中比对实验必须在第三方实验室完成,并且仪器生产商不允许直接参与比对实验,因此OMA认证难度和权威性远高于PTM认证。

  为何能够获得AOAC年度大奖

   “第一点是技术本身的先进性,第二点是实验流程设计、数据量和数据质量均得到大幅提升。” Sohier博士说。此前,食品微生物的检测技术上有很多新方发出现,但鉴定和确认技术却停滞不前,用户需要花很长时间才能得到结果。而现在用户可以用MALDI Biotyper做鉴定和确认,大幅缩短了分析时间。时间上的比对有两大提升,一是整个检测流程的时间,另一个是实验操作时间。传统方法的实验操作时间,不同的细菌,需时3-30分钟不等;对于95%以上的微生物采用MALDI Biotyper检测,每个样本的检测时间仅需20秒。传统方法从实验开始,第二天或第三天才能获得结果;而MALDI Biotyper法,依据检测样本的数量(1-95个),获得结果的时间是15-60分钟。

未来食品微生物检测面临的机遇、挑战及发展

  食品中的微生物有其多样性和复杂性,其中某些细菌因为非常相似,因此很难进行明确的区分。但因为这些微生物有的对食品无害,有的具有腐败作用,有的却是致病菌,因此如何准确的区分这些细菌对微生物学家和仪器厂商来说是机遇与挑战并存。

  MALDI检测法3大优点使其成为金标准

  MALDI检测方法近年来逐渐成为食品微生物检测首选,有如下三大技术优势:

  1.检测速度快。MALDI检测方法速度最快,只需20秒,超过目前所有微生物分析方法;即使核酸法也需要十几分钟到几个小时。

  2.MALDI不需要特殊的使用环境,无需建立高标准要求的实验室,而核酸技术对实验环境要求较苛刻。

  3.检测人员无需高深的专业背景即可完成检测。分子生物学方法需要比较专业的人士。根据布鲁克所提供的培训方案,检测人员只需一天的培训即可达到相应检测能力要求,完成微生物检测。

  标准化的检测机构对于MALDI检测方法非常青睐,它符合标准化技术,并可适用于不同的实验室的环境和条件。例如ISO两个标准化的方法用作Campylobacter(弯曲杆菌)和Vibrio(弧菌)的鉴定。自从MALDI Biotyper成为OMA方法以来,用MALDI Biotyper鉴定这两种细菌的方法不再是替代法,而成为金标准。

  应对微生物检测的挑战

  精准地区分近缘细菌是微生物检测一直以来面对的挑战。布鲁克致力于提高鉴别的分辨率,一方面通过开发新的软件和新的算法提高分辨能力;另外一方面研发全新的技术,除了MALDI Biotyper技术以外,布鲁克正在致力于开发基于傅里叶红外光谱技术的IR Biotyper方法进行菌株分型。

  食品微生物检测的发展趋势

  “简单、简单、再简单”,Sohier博士毫不犹豫地回答:“操作简单,数据分析后获得简单明了的结果。”布鲁克的技术无论是质谱法还是红外法,同全基因组分析技术都是互补的,布鲁克的技术操作简单、结果准确清晰、检测成本经济;而全基因组分析不仅需要很强的核酸技术背景,也需要很强大的数据分析能力。而在食品工业里,时间非常重要,因为有些食品容易腐败,即使对保质期较长的食品,存储也会增加成本。有些食品保质期很短,有些是发酵食品,时间一长性质就会变化。所以快速、简便的方法非常符合市场需求。“我们开发产品的思路是给基层的操作人员使用,为决策层提供准确、实时的数据。在食品工业中能够准确快速的判断对于经济上的影响也非常大,可以大幅提升决策者的风险控制能力。我们提供精准、复杂的技术,而目的却是简便的操作,提供准确、实时的数据。”Sohier博士说。

  CICC在标准化方面发挥的作用

  “我非常荣幸以演讲嘉宾身份收到CICC(China Centre of Industrial Culture Collection中国工业菌种保藏中心)主办方的邀请,并且我一到中国就像公主一样受到热情接待”,Sohier博士说到。Sohier博士表示,这次CICC在中国举办的学术会议与欧美无异,学术氛围非常好,同时针对不同研究方向也有非常好的准备。此次CICC在中国举办的会议为学术界提供了一个绝佳的实践和教学的机会,为推动工业和食品微生物检测在中国的发展做出了重要贡献。

  在此次会议期间,布鲁克与CICC也达成共识,双方一致认为法规的一致性对于厂商和实验室非常重要,无论在食品、工业品还是药品检测,检测标准是保证出厂产品质量的最后一道防线。由于中国处于全球一体化进程当中,交易、贸易和法规的一致性是保证交易机制、质量控制、风险评估的重要手段,“无论是在检测标准方面,还是在贸易往来方面,标准化是保证秩序的重要手段,因此我希望CICC在标准化方面能够发挥更大的作用。”Sohier博士说到。

  Daniele Sohier博士现担任布鲁克微生物与诊断部门工业微生物全球业务发展经理,主要负责协调沟通产品研发与市场需求,推动布鲁克与各国际组织之间的密切合作,促进布鲁克微生物产品的认证和推广,使得布鲁克拥有的新技术能够在工业微生物领域更符合规范的同时获得更多的认知和发展。

  Daniele Sohier博士简介:

  ISO/CEN国际标准化组织工作组召集人/委员,法国标准化协会 (AFNOR)认证委员会委员,欧盟认证机构MicroVal技术委员会委员,国际分析家协会AOAC委员,欧洲国际食品保护联合会(IAFP)主席。在ISO、AOAC等国际标准认证、微生物学国际标准方法验证以及分子生物学技术在食品安全质量中的研究应用等方面有着丰富的经验。1999年至今历任法国农业研究院助理教授,法国ADRIA食品技术研究院食品安全质量专家及实验室方法验证专家,现担任布鲁克微生物与诊断部门工业微生物全球业务发展经理。


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