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超高速冷冻离心机测定生物大分子沉降系数的方法

2019.12.31

生物大分子的沉降系数是一个很重要的物理化学参数,可用超高速冷冻离心机的界面移动法测定。

超高速冷冻离心机的界面移动法可采用单扇形杯,使用Schlieren光学系统,将生物大分子样品溶液充注到分析池后,在离心力场的作用下,生物大分子在池中离开气液弯月面,从而测定其沉降速度。若样品为蛋白质溶液,可配置成1mg/mL浓度,在加入到分析池前,样品预先对缓冲液进行透析。另一只平衡用的单扇形杯加入缓冲液,其弯月面应与样品充注杯一样高。离心转速的选择应以该目标蛋白质分子能在1.5~2小时内完全沉降到池底为准。离心时间确定后,调节光电扫描或照相时间间隔,使之在整个实验时间内能扫描或照相6~10次。然后对Schlieren图进行分析计算,得出沉降系数值。


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