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核糖体的离心分离

2020.7.14

1)概述

生物体细胞中除极少数细胞(如精子细胞)外,几乎所有细胞都含有核糖体(ribosome)。核糖体或成群或单个地分布在胞质中或附着在某些膜上(如内质网膜)。
电镜观察到核糖体是没有包膜的电子致密颗粒,呈圆或椭圆形,平均直径200A,哺乳动物的真核细胞中核糖体沉降系数为80S,分子量为500万。在原核细胞中核糖体沉降系数为70S,分子量为380万。
核糖体的主要成分是核糖核酸(RNA)和蛋白质,构成核糖体的核酸为核糖体核糖核酸(rRNA),分子量很大,约占细胞内RNA总量的75%以上。rRNA与蛋白质结合成核糖体。核糖体中rRNA与蛋白质的含量大致相等,但在蛋白质合成中所起的作用不同。rRNA使mRNA与tRNA的相互作用稳定,而核蛋白颗粒上的蛋白质提供蛋白质合成过程中所需要的酶。
目前已经知道在真核细胞中rRNA是在核仁内合成的,核仁中含有较大的rRNA的前体分子即45S RNA。核仁的原纤维可能就是45S RNA的形态表现。45SRNA可裂解为28S RNA和18S RNA,分别与蛋白质结合成为核糖体的大,小亚基,它们是核仁区颗粒的形态基础,亚单位进入胞质后,可暂时储存在胞质中,当需要合成蛋白质时,这些亚单位就组合成核糖体。在蛋白质合成完毕后,核糖体再分解成为亚单位储存。

2)核糖体组成模式:

3)核糖体离心分离方法简介

1.分离原核细胞70S核糖体亚基:
大亚基50S
小亚基30S
转头:甩平转头日立P65ST或P56ST
梯度:10%-40%蔗糖线性梯度
方法:速度--区带密度梯度离心法
离心参数50,000rpm,2.5小时,4℃

2.分离真核细胞内80S核糖体亚基
大亚基60S
小亚基40S
转头:P40ST(6*13ml)
梯度:10%~30% 蔗糖线性梯度
方法:速率区带密度梯度离心
离心参数:40000rpm,4.5小时,4℃。

3.分离原核细胞内70S核糖体亚基
转头:P56ST
梯度:15%~40%蔗糖线性梯度。
方法:等密度离心法。
离心参数:48,000rpm,6小时,4℃


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