生物样品的前处理技术--蛋白质的提取
由于大部分蛋白质都能溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液,所以蛋白质的提取一般是以水溶液为主,其中盐溶液和缓冲溶液对蛋白质的稳定性好、溶解度大,是提取蛋白质最常用的溶剂。当细胞粉碎后,用盐溶液或缓冲溶液提取蛋白质时,应注意以下一些条件。
(1)盐浓度
常用等渗盐溶液,尤其以0.02～0.05mol/L磷酸缓冲溶液和碳酸缓冲落液、0.15mol/L氯化钠溶液应用较多。但有些蛋白质在低盐浓度下溶解度较低,需用浓度较高的盐溶液,如脱氧核糖核蛋白需用1mol/L以上的氯化钠溶液提取;而另一些蛋白质则在低盐浓度溶液或水中溶解度较高,如某些霉菌中的脂肪酶用水提取效果更好。因此,在用水溶液提取蛋白质时,需根据所要提取的蛋白质来选择不同种类和不同浓度的盐溶液。
(2)pH值
由于蛋白质的溶解度和稳定性与pH值关系很大,因此pH值的选择对蛋白质的提取十分重要。提取蛋白质时,提取溶液的pH值应选定在该蛋白质的稳定范围,在该蛋白质等电点的两侧,提取碱性蛋白质时要选在偏酸一侧,提取酸性蛋白质时要选在偏碱一侧,以增大蛋白质的溶解度,提高提取的效率。
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