液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中，为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如，纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。
 
一、对液相色谱仪的要求
 
⒈流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。
 
⒉流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
 
⒊不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
 
⒋使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
 
⒌长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如，甲醇等)，因为，纯水易长霉。
 
⒍每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
 
⒎C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
 
⒏堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗，清洗方法：
 
①以异丙醇作溶剂冲洗；
 
②放在异丙醇中间用超声波清洗；
 
③用10％稀硝酸清洗；
 
⒐气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
 
⒑如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
 
⒒要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
 
⒓更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
 
二、常见故障断定及解决方法
 
⒈保留时间变化
 
⑴柱温变化：柱恒温，必要时需配置恒温箱。
 
⑵等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱。
 
⑶缓冲液容量不够：用》25mmol/L的缓冲液。
 
⑷柱污染：每天冲洗柱。
 
⑸柱内条件变化：稳定进样条件,调节流动相。
 
⑹柱快达到寿命：采用保护柱。
 
⒉保留时间缩短
 
⑴流速增加：检查泵,重新设定流速。
 
⑵样品超载：降低样品量。
 
⑶键合相流失：流动相pH值保持在3~7.5检查柱的方向。
 
⑷流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀。
 
⑸温度增加：柱恒温。
 
⒊保留时间延长
 
⑴流速下降：管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡。
 
⑵硅胶柱上活性点变化：用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱。
 
⑶键合相流失：流动相pH值保持在3~7.5检查柱的方向。
 
⑷流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀。
 
⑸温度降低：柱恒温。
 
⒋出现肩峰或分
 
⑴样品体积过大：用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%。
 
⑵样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂。
 
⑶柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件。
 
⑷柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品。
 
⑸进样器损坏：更换进样器转子。
 
⒌鬼峰
 
⑴进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗。
 
⑵样品中未知物：处理样品。
 
⑶柱未平衡：重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)。
 
⑷三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) ：每天新配,用抗氧化剂。
 
⑸水污染(反相) ：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水。
 
⒍基线噪声
 
⑴气泡(尖锐峰) 流动相脱气：加柱后背压。
 
⑵污染(随机噪声) ：清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂。
 
⑶检测器灯连续噪声：更换氘灯。
 
⑷电干扰(偶然噪声)：采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)。
 
⑸检测器中有气泡：流动相脱气,加柱后背压。
 
⒎峰拖尾
 
⑴柱超载：降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相。
 
⑵峰干扰：清洁样品,调整流动相。
 
⑶硅羟基作用：加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品。
 
⑷柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品。
 
⑸柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件。
 
⑹死体积或柱外体积过大：连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管。
 
⑺柱效下降：用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。
 
⒏峰展宽
 
⑴进样体积过大：用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%。
 
⑵在进样阀中造成峰扩展L进样前后排出气泡以降低扩散。
 
⑶数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点。
 
⑷检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%。
 
⑸流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相。
 
⑹检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器。
 
⑺保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱。
 
⑻柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小。
 
⑼样品过载 : 进小浓度小体积样品。

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