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标签： 大鼠 视神经 少突 胶质
大鼠视神经少突胶质细胞培养可以：（1）获得大鼠视神经少突胶质细胞；（2）用于视神经损伤修复研究；（3）用于少突胶质细胞相关课题研究。
牛血清培养法
Wistar大鼠
亚硒酸钠 腐胺 转铁蛋白 胰岛素 甲状腺素 黄体酮 谷氨酰胺 小牛血清 兔抗鼠GC抗体
眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱
一、实验步骤
1. 取新生2 d 的Wistar大鼠10 只，无菌条件下取出双侧视神经。
2. 接种至24孔培养板内经多聚赖氨酸处理的盖玻片上。
3. 加入含30g·L-1 小牛血清的DMEM/F12 培养基，37°C，50mL/L CO2，100%湿度连续培养3 d 。
4. 3 d 后弃废液，改为含 5g·L-1 小牛血清DMEM/F12 条件培养液继续培养。
5. 每周换液2次。在获得足够的细胞数量后，改用无血清条件培养液继续培养，每2 d 换液一次。
二、形态学观察每天在倒置显微镜，观察培养细胞的生长过程和形态学变化并拍照。三、免疫细胞化学鉴定
1. 将含细胞盖玻片取出，0.01 mol·L-1 PBS冲洗3 次×5 min。2. 冷丙酮固定10 min。3. PBS冲洗(3 次×5 min)。4. 30g·L-1 过氧化氢室温孵育15 min。5. PBS冲洗3 次×5 min。6. 滴加正常山羊血清，室温孵育20 min。7. 滴加1:100 GC抗体，阴性对照以PBS代替一抗，37°C孵育60 min。8. PBS冲洗3 次×5 min。9. 滴加 生物素标记羊抗兔IgG，37°C，20 min。10. PBS冲洗3 次×5 min。11. 滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液。12. DAB工作 液显色，自来水终止反应。13. 脱水，透明，DPX封片保存。
四、结果
1. 形态学观察结果
组织块24 h 开始贴壁，48～72 h 可见神经组织边缘游出少量细胞，主要为圆形或梭形(图 1)。8～9 d 左右，细胞基本铺满培养孔。此时改用无血清条件培养基培养进行纯化。培养过程中，部分细胞死亡。12 d 左右获得的细胞胞体基本为呈圆形或多角型，直径约 6～10 µm。细胞核较大，胞质少(图 2)。
原国家质检总局 教授
