影响ELISA实验的因素和对策（二）
参考ELISA#加样
温 育：
不好的操作原因：
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
解决办法：
贴封片或加盖：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜复盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。
按说明步骤严格控制操作时间。
建议采用空气浴进行温育。
参考ELISA实验操作中的温育(incubation)
洗 板：
结果不好的可能原因
采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
反应板过多造成洗板等待时间长。
在间接法中如本底较高。
在ELISA 操作中，洗涤是最主要的关键技术，操作时尤为注意：
保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後最好在吸水纸或毛巾（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。）；
注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释，应按要求稀释，所用的水电导率最好在1.5us/cm 之下，洗液如果结晶应待其融解後配制。
保证洗板浸泡时间为40 秒左右，孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。
合理安排，或多用几台洗板机。
在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
参考ELISA#洗涤
显 色：
结果不好的可能原因
显色剂配制後放置时间过长或使用过期显色剂；
加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
解决方法：
显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；
加样时保持显色剂不外流，且加样量要准确，顺序不能颠倒。
A、B液应避免接触金属器械。
可以参考ELISA#显色和比色
终 止：
结果不好的可能原因：
加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。
解决方法：
加终止液时应避免产生气泡，及时终止显色。
读 板：
结果不好的可能原因：
读板时板底底部不透明、带水滴、有划痕及不规则的表面。
应保证酶标板清洁。
此外酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15~30℃，使用前先预热仪器15-30 分钟，测读结果更稳定。
全过程：
整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;
实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
严谨的设计，优质的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证ELISA必要条件。在实际操作中必须严格遵照规定操作，以严谨的作风检测每一份标本，才能保证试验效果。
ELISA实验的结果判断和数据分析
请参考试剂盒的说明书。
示例：
某定量试剂盒：
